【摘 要】
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以提取的无乳链球菌ATCC51487菌株全基因组为模板,通过PCR扩增出srtAΔN82基因,经Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切、抗性筛选等方法构建重组表达载体,测定不同诱导温度、诱导剂浓度及诱
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院,中国水产科学研究院长江水产研究所
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2019YFD0900104),国家自然科学基金项目(31702368)
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以提取的无乳链球菌ATCC51487菌株全基因组为模板,通过PCR扩增出srtAΔN82基因,经Eco RⅠ和XhoⅠ双酶切、抗性筛选等方法构建重组表达载体,测定不同诱导温度、诱导剂浓度及诱导时间对表达产物的影响,利用亲和层析和离子交换层析纯化蛋白,并使用荧光共振能量转移法测定蛋白活性。结果显示,试验构建的pGEX-6p-1-srtAΔN82载体转化至BL21(DE3)后,在37℃条件下经1 mmol/L IPTG诱导表达6 h后可得到大量的可溶性蛋白,且纯度大于85%。纯化后的SrtAΔN82与底物作用
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