探讨艾塞那肽对AR42J细胞株的损伤及其可能机制。
方法1、5、10 pmol/L艾塞那肽处理AR42J细胞株24、48、72、96、120 h，噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力，筛选最佳浓度和时间作为后续实验条件。设置空白对照组(NC)、艾塞那肽组(Ex-4)和Ex-4＋z-VAD-fmk组，检测艾塞那肽是否可直接导致AR42J细胞凋亡；设置NC组、Ex-4组、3-MA组和Ex-4＋3-MA组，探究3-MA能否抑制艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡。3-MA为自噬抑制剂，z-VAD-fmk为凋亡抑制剂。细胞活力检测采用MTT法。流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测caspase-3等凋亡相关蛋白以及微管相关蛋白轻链3(LC3)自噬相关蛋白表达。
结果以10 pmol/L艾塞那肽作用72 h为后续实验条件。z-VAD-fmk预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性，两组细胞活力为(49.4±3.0)%比(81.2±3.3)%，差异有统计学意义(P<0.05)。Ex-4组细胞凋亡率(28.2±1.4)%，高于NC组的(3.6±0.8)%，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot也显示caspase-3表达明显上调，而z-VAD-fmk预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的细胞凋亡和caspase-3表达增加。3-MA预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性，处理72 h两组细胞活力为(49.8±2.5)%比(79.1±2.3)%，差异有统计学意义(P<0.05)。Ex-4组细胞凋亡率为(29.2±3.2)%，高于Ex-4＋3-MA组的(14.5±2.1)%，差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果表明艾塞那肽可上调LC3B-Ⅱ、p62和caspase-3的表达，而3-MA预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的LC3B-Ⅱ和caspase-3上调，但p62的表达却进一步上调。
结论艾塞那肽可诱导AR42J细胞凋亡，3-MA可通过抑制自噬而抑制艾塞那肽诱导的凋亡。使用3-MA可作为减轻艾塞那肽对胰腺腺泡细胞毒性的一种潜在方法。