针对中药穿心莲现有研究中,以穿心莲内酯为内参物建立的“一测多评”（QAMS）方法存在色谱分离的分离度不佳,相对校正因子的耐用性不强及含量测定结果的准确度不高等问题,本研究通过色谱条件的优化和方法学的系统考察,首次采用脱水穿心莲内酯为内参物,计算相对校正因子,建立同步测定穿心莲中穿心莲内酯（A）、新穿心莲内酯（B）、14-去氧穿心莲内酯（C）和脱水穿心莲内酯（S）等4种二萜内酯的“一测多评”质量控制方法。在当前HPLC色谱条件下,待测成分分离度良好（R>1.5）,方法学考察符合定量分析的要求。该法确立的相对校正因子（RCFs）分别为:f_A/S=0.65,f_B/S=0.54,f_C/S=0.78,相对校正因子在3种品牌HPLC仪、5种品牌C₁₈柱、不同流速(0.9,1.0,1.1 mL·min^-1)和不同柱温（25,30,35℃）下的RSD分别为1.3%～5.1%,0.25%～0.33%,0.07%～0.15%,0.07%～0.22%,表明相对校正因子的耐用性良好。采用相对保留值法对待测成分的色谱峰进行定位,其相对保留值分别为:r_A/S=0.44,r_B/S=0.86,r_C/S=0.97,相对保留值在不同仪器不同色谱柱下的RSD为0.03%～1.6%,表明待测成分的色谱峰定位准确。分别采用QAMS法和外标法（ESM）对6批穿心莲药材和18批穿心莲饮片中的上述4种成分进行含量测定,2种方法所得结果的相对误差均<2.0%,无显著性差异,表明当前QAMS法的准确度良好。因此,本研究以脱水穿心莲内酯为内参物建立了4种二萜内酯类成分同步测定的“一测多评”方法,该法准确度高,耐用性强,能有效控制穿心莲的内在质量,可以为穿心莲行业标准的制订及药典标准的完善提供技术依据。