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金黄色葡萄球菌,简称金葡菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)可引起奶牛乳房炎、肺炎和关节炎等多种动物疾病,给养殖业和乳制品行业造成重大经济损失。金葡菌能对多种抗菌药物产生耐药性,且多药耐药现象普遍,给金葡菌感染性疾病的防治带来较大困难。本研究分析了分离自辽宁地区奶牛乳房炎源金葡菌分离株的耐药性及毒力基因分布情况,以期为辽宁地区临床合理防治奶牛乳房炎提供依据。本研究从辽宁地区患有临床型乳房炎奶牛的乳样中分离、生化鉴定金葡菌,并利用PCR检测nuc基因进一步鉴定金葡菌分离株。采用微量肉汤稀释法测定不同抗菌药物如β-内酰胺类、大环内酯类和氨基糖苷类药物等对金葡菌分离株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentrations,MICs),分析其耐药表型。结果显示,共分离鉴定出55株金葡菌,且不同菌株之间耐药程度有所差异。金葡菌分离株对青霉素和林可霉素耐药率最高,耐药率均为90.91%;而金葡菌分离株对杆菌肽和氨基糖苷类药物最为敏感,杆菌肽、庆大霉素和阿米卡星的耐药率分别为14.55%、10.91%、14.55%。此外,金葡菌分离株多药耐药现象较严重,未发现对25种抗菌药物均敏感的菌株,且每株分离株对至少5种药物具有耐药性。采用PCR技术对55株分离自辽宁地区的患有临床型乳房炎奶牛的金葡菌分离株进行7种毒力基因的检测,分析辽宁地区奶牛乳房炎源金葡菌分离株毒力基因流行情况。结果表明,共检出3种毒力基因,分别为hla(58.18%)、clfA(36.36%)、fnbA(29.09%);未检出sea、seb、eta、etb毒力基因。采用实时荧光定量PCR技术测定3组耐β-内酰胺类药物的金葡菌分离株hla基因mRNA表达量。结果显示,hla基因mRNA表达量随金葡菌分离株耐β-内酰胺类药物种数的增多而下降,耐2种β-内酰胺类药物组和耐4种β-内酰胺类药物组与标准株相比,hla基因mRNA表达量的差异均极显著升高(P<0.01);但耐6种β-内酰胺类药物组与标准菌株相比hla基因mRNA表达量差异不显著(P>0.05)。选取9株不同耐药表型的金葡菌分离株,以金葡菌质控菌ATCC29313为对照,进行小鼠致病性试验,分析不同耐药表型对致病性的影响。研究结果显示,标准菌株、耐2种β-内酰胺类药物组、耐4种β-内酰胺类药物组、耐6种β-内酰胺类药物组小鼠死亡率的均值分别为33.33%、77.78%、50%、27.78%。随着奶牛乳房炎源金葡菌分离株耐β-内酰胺类药物种数的增多,小鼠死亡率逐渐降低。本研究分析了辽宁地区奶牛临床型乳房炎源金葡菌分离株耐药表型及毒力基因的流行情况,以及耐药性对其致病性的影响,为该地区科学合理用药以及有效防控奶牛乳房炎疾病提供理论依据。