miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响

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目的:初步探讨miR-136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法:选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR-136mimic(模拟物组)和miR-136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT-PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR-136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK-8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR-136下游靶基因;qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达.结果:与对照组相比,模拟物组细胞miR-136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK-8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR-136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05).结论:miR-136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移.“,”Objective:To investigate the effect of miR-136 on the biological functions of glioma U 251 cells.Methods: Glioma cell line U251 selected in the study were divided into two groups , miR-136 mimic( mimic group) and miR-136 mimic negative control ( control group ) was transfected respectively . qRT-PCR was used to detect the expression of miR-136 in the two groups cells;24 h after transfection , the cell density of the two groups was observed under microscope; CCK-8 assay was applied to evaluate the proliferative ability;the invasion and migration of glioma U 251 cells was evaluated by Transwell assay and scratch wound assay; the binding sites of miR-136 were predicted by miRanda; the expression of FZD4 mRNA and FZD4 protein was detected by qRT-PCR and Western blotting , respectively .Results:The expression of miR-136 in mimic group was significantly higher than control group ( P<0 .05 );24 h after transfection , the cells of mimic group were less than the control group;CCK-8 showed that the pro-liferative activity of U251 cells in mimic group was significantly lower than that of the control group ( P<0.05 );Transwell assays and scratch wound assays revealed that the invasion and migration of U 251 cells in mimic group were lower than the control group;according to the miRanda , we found that FZD4 was a directly target gene of miR-136; the expression of FZD4 mRNA and the expression of FZD4 protein in mimic group were significantly lower than the control group ( both P <0 .05 ) .Conclusion: miR-136 might inhibit the proliferation , invasion and migration of U251 cells by regulating FZD4.
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