慢性乙型肝炎肝硬化合并肝癌患者不同组织微小RNA的差异表达

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目的

筛选乙型肝炎肝硬化合并肝癌患者肝癌组织与肝硬化组织微小RNA(miRNA)差异表达谱,为研究miRNA在肝细胞癌变机制中的作用提供基础。

方法

选取2013年1—4月于新疆医科大学第一附属医院行肝癌根治治疗的慢性乙型肝炎肝硬化合并肝癌患者9例。利用Trizol法提取肝癌组织和配对的肝硬化组织细胞中的总RNA,分光光度计NanoDropND-1000进行定量,变性凝胶电泳分析提取总RNA质量。利用芯片技术对提取的RNA经miRNA芯片进行杂交,结果经扫描读数,Significance Analysis of Microarrays 3.02软件挑选差异表达基因,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)验证芯片的结果。

结果

肝癌组和肝硬化组中共筛选出15个差异表达的miRNA,其中有7个基因在肝癌中上调表达,分别为hsa-miR-1269,hsa-miR-18a,hsa-miR-1180,hsa-miR-1301,hsa-miR-182,hsa-miR-222,hsa-miR-362-5p;8个基因在肝癌中表达下调,分别为hsa-miR-99a,hsa-miR-10a,hsa-miR-30a,hsa-miR-30e,hsa-miR-139-5p,hsa-miR-422a,hsa-miR-199a-3p,hsa-miR-199b-3p。实时荧光定量逆转录PCR验证结果显示,上调表达基因miR-1269在肝癌组和肝硬化组中的平均表达丰度分别为12.1±4.0和16.7±2.4,差异有统计学意义(P=0.010)。下调表达基因miR-199b-3p在肝癌组和肝硬化组中的平均表达丰度分别为5.4±1.6和3.0±0.8,差异有统计学意义(P=0.003)。验证结果与miRNA微阵列芯片结果一致。

结论

肝癌组织与肝硬化组织存在差异表达的miRNA;试验筛选出的差异表达基因与国内外文献报道有不同;这些上调和下调表达的miRNA可能参与了肝癌的发生。

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