【摘 要】
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目的 研究HIV-1载体中的一些元件如Rev和Tat蛋白对其骨架的转录及外源基因表达水平的影响.方法 将HIV-1表达GFP载体(FUGW)单独或分别与Rev蛋白表达质粒(pLP2)、Tat蛋白表达质
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目的 研究HIV-1载体中的一些元件如Rev和Tat蛋白对其骨架的转录及外源基因表达水平的影响.方法 将HIV-1表达GFP载体(FUGW)单独或分别与Rev蛋白表达质粒(pLP2)、Tat蛋白表达质粒(pcDNA3.1-Tat),及表达Rev和Tat蛋白的质粒(△8.9)等摩尔共转染入293T细胞后,经实时定量RT-PCR、FACS、荧光显微镜镜检等方法检测,比较其表达量.结果 Rev与RRE结合后,载体骨架及外源基因的转录是单独转染FUGW时的3倍,Tat与TAR结合后,则提高其骨架及外源基因的转录近4倍,而Rev和Tat蛋白的协同作用,其转录本则可提高至6倍.FACS和荧光显微镜镜检也显示GFP蛋白表达量明显提高.F-TPO载体(HIV-1载体乳腺特异表达促血小板生成素)与△8.9在小鼠乳腺上皮细胞HC-11共转染和表达,则TPO蛋白的表达量接近pcDNA3.1-TPO载体的8倍.结论 HIV-1载体中存在着提高转录和翻译基因的元件,可提高其骨架的转录和外源基因的表达,且该现象并不依赖于细胞类型和外源基因的种类.
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