【摘 要】
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目的:在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段(soluble TNF-related apoptosis-inducing Ligand, sTRAIL),并鉴定其生物学活性.方法:以人胎盘cDNA为模
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所分子生物学研究室,生物安全病原微生物国家重点实验室,北京,100071
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目的:在大肠杆菌中表达人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的可溶性片段(soluble TNF-related apoptosis-inducing Ligand, sTRAIL),并鉴定其生物学活性.方法:以人胎盘cDNA为模板,根据GenBank中序列NM_003810设计引物,以PCR方法扩增sTRAIL基因,将其克隆入pET-32a,转化BL21(DE3),IPTG诱导后,收集菌体,超声破碎,离心取上清纯化,鉴定其生物学活性.结果:表达载体经DNA测序鉴定,氨基酸序列与预期一致.宿主菌高效表达目的蛋白,经SDS-PAGE、氨基酸测序鉴定均正确.可溶部分占表达总量的20%.经过两步纯化,sTRAIL纯度达到95%,表达量可达20 mg/L培养基.纯化产物在体外能够明显诱导L929、NCI157、BEL7402、DU145等细胞凋亡,Hela细胞不敏感.对于L929,其半数致死量为0.10 μg/ml.结论:本研究在原核表达系统中表达了sTRAIL,获得高纯度sTRAIL蛋白,为其进一步研究提供了良好基础.
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