论文部分内容阅读
目的 检测热休克蛋白75(Mortalin)在肝癌细胞株中的表达,探讨其在肝癌细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法 选择5株人肝癌细胞和1株正常肝细胞(L02),采用蛋白印迹和实时定量PCR检测Mortalin的表达水平.应用RNA干扰技术(shRNA)抑制肝癌细胞株MHCC97H内源Mortalin基因的表达.采用MTT试验和流式细胞仪检测细胞活性,通过蛋白印迹和实时定量PCR检测Mortalin、E-cadherin和Vimentin的表达水平.实验设空白组、对照组和shRNA组.结果 Mortalin在Hep3B、MHCC97H、HepG2和HCCLM3中表达,而在MHCC97L和L02中不表达.干扰24 h后,绿色荧光显示质粒成功转进MHCC97H.MTT试验显示转染对三组细胞的毒害作用分别为0％、2.5％和3.5％,流式细胞仪检测三组细胞早期凋亡率分别为0.8％,4.5％和9.2％.这说明转染没有引起严重的细胞损伤.干扰48 h后,蛋白印迹和实时定量PCR检测结果显示,shRNA明显抑制了Mortalin的表达.收集干扰24 h、48 h、72 h和96 h后的细胞,应用蛋白印迹和实时定量PCR分析Mortalin、E-cadherin和Vimentin的关系,发现Mortalin表达抑制伴随着E-cadherin表达升高和Vimentin 表达降低.结论 Mortalin的表达可能与肝癌细胞的转移表型有关,可促进肝癌细胞上皮间质转化。