逆转录病毒介导外源基因高效感染大鼠骨髓间充质干细胞

来源 :中国现代医学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gaoyyop
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目的通过逆转录病毒系统将小鼠同源盒基因Sox1转移至大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),检测外源基因的表达,感染效率及感染时间。方法常规分子生物学亚克隆技术构建重组逆转录病毒载体,转染至包装细胞株PT67,制备含目的基因的重组逆转录病毒液,感染rMSC,并用带EGFP表达盒的pLEGFP-N1载体的逆转录病毒系统作为平行对照,评估感染率;使用Westernblot以及免疫组织化学的方法检测携带目的基因的重组逆转录病毒在rMSC中的感染和表达情况。结果本实验成功地制备了pLXSN-Sox1重组逆转录病毒载体并制备出高滴度病毒颗粒;将病毒上清感染rMSC,EGFP阳性细胞为21%,感染时间持续20d,而对照脂质体转染法EGFP阳性细胞仅为3%。免疫组化及Westernblot显示用重组逆转录病毒液感染的rMSC可表达外源基因产物Sox1蛋白。结论采用逆转录病毒介导的方法可以将外源性基因高效转移至rMSC中,并有外源性基因的稳定表达。
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