一种简单有效的平端PCR产物克隆方法

来源 :天津医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bbpooh123
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介绍一种使用pUC质粒做为载体进行平端PCR产物连接的方法。首先将特异的PCR扩增产物纯化,不经任何处理,与用SmaⅠ内切酶消化的载体pUC质粒进行连接,并在连接体系中加入SmaⅠ内切酶,23℃连接18~20小时。转化宿主菌后,挑选白色菌落进行重组鉴定。在PCR产物<500bp的DNA片段重组阳性率占转化菌白色菌落的70%,而>1000bp的DNA片段重组阳性率占转化白色菌落的10~20%。
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