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1 材料和方法1.1 材料 ①KC的培养：无菌条件下手术取人包皮，尽量剪除皮下组织，置于1.5 g.L-1 Dispase液中4℃ 18～24 h. 将真表皮分离，取表皮分别置于2.5 g.L-1胰蛋白酶0.1 g.L -1二乙胺四乙酸二钠(EDTA)及含100 mL.L-1血清的DMEM中吹打成单细胞悬液，离心300 g.min-1 ，10 min，弃悬液，KC无血清培养基（GibcoBRL）重悬细胞，调整细胞数至1×103.L-1, 接种 至6孔培养板，24 h后换液. 当细胞生长至80%～90%汇合时1∶2传代.1.2 方法 ①分组：KC传代时分为两组，预处理组：细胞约80%汇合时， 加入2.5 g.L-1胰蛋白酶0.1 g.L-1 EDTA，当胞体开始回缩时吸除胰酶，终 止消化，此时，基本上无细胞脱落. 继续培养12～18 h，2.5 g.L-1胰蛋白酶0.1 g.L-1 EDTA消化，KC胞体回缩变圆 ，细胞接近脱离瓶(皿)壁时终止消化，1∶2传代. 对照组：当KC 80%～90%汇合时2.5 g.L -1胰蛋白酶0.1 g.L-1 EDTA消化，至KC胞体回缩变圆，细胞接近脱离瓶壁时终止消化，1∶2传代; ②计算细胞贴壁率:首次传代接种后3，6，16和24 h分别记数200个细胞，计算平均细胞贴壁率； ③吖啶橙和溴化乙锭染色：在第6，8，10代传代接种前取细胞悬液10 μL加吖啶橙和溴化乙锭混合物10 μL，轻轻摇匀置室温5 min，荧光显微镜下记数200个细胞，观察细胞受损情况，计算活细胞比率； ④按文献方法计算细胞倍增次数，绘制细胞生长曲线［1］.