论文部分内容阅读
【摘 要】目的：探讨胶体金法和ELISA法联合检测手足口病肠道病毒71型IgM 抗体。方法：胶体金法和ELISA法联合检测EV71 型病毒并对221例结果进行比较。结果：胶体金法和ELISA法检测EV71 型病毒IgM 抗体无显著差异（P>0.05）。结论：胶体金法和ELISA法联合检测EV71 型病毒既能保证快速检测，又能提高准确性。
【关键词】胶体金法；ELISA法；肠道病毒71型
【中图分类号】R440 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0793—02
手足口病（HFMD）是一种由多种肠道病毒感染引起的儿童常见的传染性疾病，传染性强，在世界范围内包括我国多省市都出现过多次暴发与流行。鉴于我国目前手足口病发病的严峻形势，2008年5月HFMD被列入法定丙类传染病，要求各级卫生部门做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。
引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中以柯萨奇病毒A16型（CAl6）和肠道病毒71型（EV71）最为常见。与其他肠道病毒引起的手足口病相比，由EV71型感染引起的疾病发生重症比例较大，病死率较高，且最易导致流行。国内的数次暴发流行经卫生部证实均为EV7l引起的[1]。我院每年收治手足口病患儿数百例。为贯彻落实省政府要求的“四早”措施，建立手足口病流行动态监测与应急性检测方法具有非常重要的意义。对EV71的早期诊断、早期治疗成为治愈该病的关键。我科同时采用胶体金法和ELISA法检测EV71型病毒IgM抗体，结合两者优势，能够快速、准确的检测EV71型病毒。
1 材料与方法
1.1 一般资料
患者为我院儿科2012年3月至2013年3月收治的疑似HFMD患者，男132例，女89例，年龄4月～12岁。
1.2 试剂与方法
试剂由北京万泰生物药业股份有限公司生产：胶体金法（国食药监械（准）字2011第3401197号，京药监械生产许20040097号）；ELISA法（国食药监械（准）字2010第3400526号，京药监械生产许20040097号）。
标本为患者静脉血2mL，肝素钠抗凝。当日标本采用胶体金法进行快速检测，检测完标本保存，第二日再采用ELISA法集中批量检测，操作均按试剂盒要求严格进行检测。
1.3 统计学分析
采用Spss 19.0统计软件进行数据处理。
2 结果
同时采用胶体金法和ELISA法检测EV71型病毒IgM抗体，胶体金法阳性率为27.15%（60/221），ELISA法阳性率28.05%（62/221），共同阳性标本60例，总符合率96.79% ，Kappa值为0.92。经统计学分析，P>0.05，两种方法结果无显著性差异。
3 讨论
1957年新西兰首次报导手足口病后，世界大部分地区如美国、澳大利亚、意大利、法国等均有手足口病的流行报导[2]。目前手足口病的的流行在亚太地区呈上升趋势，我国自1981年在上海首次发现本病，以后北京、河北、山东等十几个省（市）均有暴发流行的报导[3]。经卫生部证实均为EV7l引起的。
EV71感染患儿主要临床表现以发热和手、足、口腔和臀部等部位出现皮疹为主，部分病例可无发热。绝大多数患者预后良好。但病毒可以侵犯呼吸系统、中枢系统、心血管系统等引起病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、心肌炎、肺水肿、肺出血、弛缓性麻痹等症状，出现临床预后较严重的神经系统综合征及心肺功能衰竭综合征，个别危重患儿可因多种原因导致死亡。EV71型手足口病是一类严重危害儿童健康的疾病，因此建立EV71快速、准确的检测通道尤为重要。
病毒培养是EV71的检测的金标准，但是费时、费力，对人员操作及设备要求高，不宜于基层医院开展。目前实验室开展的EV71检测方法有PCR、ELASA法和胶体金法3种。PCR法虽然检出率高，特异性强，但对实验条件、人员、设备要求高，操作繁琐，且仍然存在时间长、速度慢等缺点，而临床病例多为散发急诊发烧患儿，早诊断、早治疗对挽救重症患儿的生命极其重要。我院地处市中心，门诊量大，就诊患儿多，既要保证检测结果快速，又要确保结果的准确性，结合我科设备及人员上的优势，于是采用了胶体金法和ELISA法检测EV71型IgM抗体。利用胶体金法操作最为简便、快速的特点进行初步诊断，再结合ELISA法灵敏度高、特异性强的特点进行确证。结合两者优势，达到快速、准确的检测EV71型病毒的目的。
胶体金法检测EV71型病毒利用免疫层析技术检测EV71-IgM抗体，优点是操作简便，30分钟内观察结果，可单份检测、便于保存、不需特殊设备，肉眼可以直接观察结果，非常适合门/急诊病人的检测，较好地满足基层防控一线需求。缺点是需要较高浓度的标记物，灵敏度受限制，可能造成假阴性。
ELISA法检测EV71型采用酶联免疫吸附试验原理检测EV71-IgM抗体。优点是灵敏度高，漏检度低，特异性强，重复性好，可进行定量和半定量测定，可以在酶免疫分析仪上作批量检测。缺点是存在假阳性率，检测时间需要2小时左右，操作复杂，步骤多。受加样、反应温度、反应时间、洗涤彻底性等诸多因素的影响，不适用于急诊及现场的筛查。
综上所述，同时采用胶体金法和ELISA法联合检测肠道病毒71型，经统計学分析，结果无显著性差异。所以采取这两种方法的联合检测，可有效的避免单一检测方法的缺点，既能缩短了诊断时间，减少了患儿等待时间，又能得到初步确诊结果，避免漏诊，提高确诊率。符合我院门诊量大，急诊病人多的实际情况，为HFMD患儿的及时治疗提供帮助。
参考文献：
[1] 徐之良 手足口病研究进展 临床内科杂志 2009，26：509-510.
[2] 李忠，张华宁，裴耀文，等 不同分子生物学方法检测手足口病标本的应用研究[J] 检验医学与临床 2009，4（6）：268-269.
[3] 欧新华，张如胜，叶文，等 长沙市2010年手足口病EV71型VP1区基因序列分析[J] 实用预防医学 2011，18（3）：420-424.
【关键词】胶体金法；ELISA法；肠道病毒71型
【中图分类号】R440 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0793—02
手足口病（HFMD）是一种由多种肠道病毒感染引起的儿童常见的传染性疾病，传染性强，在世界范围内包括我国多省市都出现过多次暴发与流行。鉴于我国目前手足口病发病的严峻形势，2008年5月HFMD被列入法定丙类传染病，要求各级卫生部门做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。
引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中以柯萨奇病毒A16型（CAl6）和肠道病毒71型（EV71）最为常见。与其他肠道病毒引起的手足口病相比，由EV71型感染引起的疾病发生重症比例较大，病死率较高，且最易导致流行。国内的数次暴发流行经卫生部证实均为EV7l引起的[1]。我院每年收治手足口病患儿数百例。为贯彻落实省政府要求的“四早”措施，建立手足口病流行动态监测与应急性检测方法具有非常重要的意义。对EV71的早期诊断、早期治疗成为治愈该病的关键。我科同时采用胶体金法和ELISA法检测EV71型病毒IgM抗体，结合两者优势，能够快速、准确的检测EV71型病毒。
1 材料与方法
1.1 一般资料
患者为我院儿科2012年3月至2013年3月收治的疑似HFMD患者，男132例，女89例，年龄4月～12岁。
1.2 试剂与方法
试剂由北京万泰生物药业股份有限公司生产：胶体金法（国食药监械（准）字2011第3401197号，京药监械生产许20040097号）；ELISA法（国食药监械（准）字2010第3400526号，京药监械生产许20040097号）。
标本为患者静脉血2mL，肝素钠抗凝。当日标本采用胶体金法进行快速检测，检测完标本保存，第二日再采用ELISA法集中批量检测，操作均按试剂盒要求严格进行检测。
1.3 统计学分析
采用Spss 19.0统计软件进行数据处理。
2 结果
同时采用胶体金法和ELISA法检测EV71型病毒IgM抗体，胶体金法阳性率为27.15%（60/221），ELISA法阳性率28.05%（62/221），共同阳性标本60例，总符合率96.79% ，Kappa值为0.92。经统计学分析，P>0.05，两种方法结果无显著性差异。
3 讨论
1957年新西兰首次报导手足口病后，世界大部分地区如美国、澳大利亚、意大利、法国等均有手足口病的流行报导[2]。目前手足口病的的流行在亚太地区呈上升趋势，我国自1981年在上海首次发现本病，以后北京、河北、山东等十几个省（市）均有暴发流行的报导[3]。经卫生部证实均为EV7l引起的。
EV71感染患儿主要临床表现以发热和手、足、口腔和臀部等部位出现皮疹为主，部分病例可无发热。绝大多数患者预后良好。但病毒可以侵犯呼吸系统、中枢系统、心血管系统等引起病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、心肌炎、肺水肿、肺出血、弛缓性麻痹等症状，出现临床预后较严重的神经系统综合征及心肺功能衰竭综合征，个别危重患儿可因多种原因导致死亡。EV71型手足口病是一类严重危害儿童健康的疾病，因此建立EV71快速、准确的检测通道尤为重要。
病毒培养是EV71的检测的金标准，但是费时、费力，对人员操作及设备要求高，不宜于基层医院开展。目前实验室开展的EV71检测方法有PCR、ELASA法和胶体金法3种。PCR法虽然检出率高，特异性强，但对实验条件、人员、设备要求高，操作繁琐，且仍然存在时间长、速度慢等缺点，而临床病例多为散发急诊发烧患儿，早诊断、早治疗对挽救重症患儿的生命极其重要。我院地处市中心，门诊量大，就诊患儿多，既要保证检测结果快速，又要确保结果的准确性，结合我科设备及人员上的优势，于是采用了胶体金法和ELISA法检测EV71型IgM抗体。利用胶体金法操作最为简便、快速的特点进行初步诊断，再结合ELISA法灵敏度高、特异性强的特点进行确证。结合两者优势，达到快速、准确的检测EV71型病毒的目的。
胶体金法检测EV71型病毒利用免疫层析技术检测EV71-IgM抗体，优点是操作简便，30分钟内观察结果，可单份检测、便于保存、不需特殊设备，肉眼可以直接观察结果，非常适合门/急诊病人的检测，较好地满足基层防控一线需求。缺点是需要较高浓度的标记物，灵敏度受限制，可能造成假阴性。
ELISA法检测EV71型采用酶联免疫吸附试验原理检测EV71-IgM抗体。优点是灵敏度高，漏检度低，特异性强，重复性好，可进行定量和半定量测定，可以在酶免疫分析仪上作批量检测。缺点是存在假阳性率，检测时间需要2小时左右，操作复杂，步骤多。受加样、反应温度、反应时间、洗涤彻底性等诸多因素的影响，不适用于急诊及现场的筛查。
综上所述，同时采用胶体金法和ELISA法联合检测肠道病毒71型，经统計学分析，结果无显著性差异。所以采取这两种方法的联合检测，可有效的避免单一检测方法的缺点，既能缩短了诊断时间，减少了患儿等待时间，又能得到初步确诊结果，避免漏诊，提高确诊率。符合我院门诊量大，急诊病人多的实际情况，为HFMD患儿的及时治疗提供帮助。
参考文献：
[1] 徐之良 手足口病研究进展 临床内科杂志 2009，26：509-510.
[2] 李忠，张华宁，裴耀文，等 不同分子生物学方法检测手足口病标本的应用研究[J] 检验医学与临床 2009，4（6）：268-269.
[3] 欧新华，张如胜，叶文，等 长沙市2010年手足口病EV71型VP1区基因序列分析[J] 实用预防医学 2011，18（3）：420-424.