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【摘要】 总结血液分析仪各种试剂的组成及对检测结果的影响。
【关键词】 血液分析仪；试剂；对检测结果的影响
文章编号：1004-7484（2013）-12-7747-01
1 血红蛋白素
顾名思义，血红蛋白素在五分类血液分析仪中的作用只是测量血红蛋白，检测原理同三分类分析仪血红蛋白检测原理一样，唯一不同的是，三分类血液分析仪溶血素同时检测白细胞总数和分类。由于五分类血液分析仪所用血红蛋白溶血素是在单独的通道进行检测，因此当血红蛋白溶血素出现问题时，只会影响血红蛋白的结果，对白细胞总数和分类没有任何影响。
2 白細胞分类试剂（溶血素、染液）
2.1 白细胞分类试剂作用原理 五分类血液分析仪由于各厂家白细胞分类原理不同，所用的试剂也不一样。主流五分类血液分析仪白细胞分类原理主要包括高频电导激光散射联合检测法、光散射和细胞染色联合检测法、多角度激光偏振光散射检测法等，但其方法不外乎光学法加荧光染色技术。所用试剂主要包括溶血素、染液。溶血素主要是嗜酸溶血素和嗜碱溶血素，染色则根据染色原理及染色目的不同，可分为化学染色、核酸染色、过氧化物酶染色等。现在主要从试剂方面对白细胞分类作用原理以及对检测结果的影响做以下阐述。
光学法+核酸染色。白细胞4分类通道：利用激光和流式细胞原理，当血细胞通过检测通道时，在流式通道内，稀释后的血液从样本口低速进入快速运动的鞘液流中，因为稀释后的血样和鞘液的流速不同，所以不会混合，形成一个直径30微米的液流使血液样本呈一条细线穿过检测通道，在激光的照射下激发出荧光，根据荧光强度的不同以及不同角度的散射光绘制成二维散点图，对包细胞进行分类。散点图纵坐标（Y轴）表示侧向荧光强度，反映核酸染料对DNA/RNA的染色强度，横坐标（X轴）表示侧向散射光强度，反映细胞的内容物。
2.2 白细胞计数和嗜碱性粒细胞通道 在嗜碱溶血素的作用下，红细胞和血小板破碎，除嗜碱性粒细胞外的其他白细胞变成裸核。这样裸核数量加上嗜碱性粒细胞数量即为白细胞总数，再根据激光照射后散射光的不同，区分出嗜碱细胞。Y轴表示前向散射光，反映细胞体积，X轴表示侧向散射光，反映细胞内容物。结合上文4分类通道对白细胞进行4分类，即可完成对WBC总数计数及对白细胞的五分类。
2.2.1 光学法+过氧化物酶染色 用过氧化物内染色剂对WBC进行初步区分，再结合嗜碱/核通道的差异裂解原理，最终将五种白细胞准确区分开来。过氧化物酶染色技术主要是利用白细胞胞浆内各成分对过氧化物酶活性的差异来区分，其中嗜酸性粒细胞对过氧化物酶活性为“+++”，中性粒细胞对过氧化物酶活性为“+++”，单核细胞对过氧化物酶活性为“++”，而淋巴细胞和嗜碱性粒细胞与过氧化物酶不反应，这样通过染色的方法可将嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞区分开；同时结合嗜碱/核通道的差异裂解原理可将嗜碱细胞和白细胞总数检测出来，这样白细胞总数减去嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞即可得出淋巴细胞数量，最终将五种白细胞准确区分开来。
2.2.2 光学法+化学染色 化学染色剂对细胞脂质和蛋白组分进行染色，在35度下进行孵育，对单核细胞的初级颗粒、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的特异颗粒进行不同程度的染色，同时对细胞的膜也进行不同程度的着色，由于淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞对染色剂的着色程度不同，在激光和氖灯的照射下，激发出的光强度也不同，每种细胞特定的细胞核形态和颗粒的结构造成光散射的强度不同，因此可以在散点图中同时得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的结果。同时在BASO/WBC检测池中，全血样品与嗜碱溶血素混合，在35度恒温下，溶解红细胞，并使除嗜碱性粒细胞外的其他白细胞变成裸核。细胞通过鞘流微孔，每个细胞产生与细胞体积成正比的电子脉冲，绘制出BASO/WBC直方图，依据阈值设定，区分出白细胞裸核和嗜碱性粒细胞，结合化学染色对白细胞进行4分类，即可完成对白细胞的5分类。
3 网织红细胞试剂（网织红细胞稀释液、染液）。
3.1 网织红细胞试剂作用原理 存在于网织红细胞稀释液中的表面活性剂使红细胞和白细胞肿胀并轻微损伤细胞膜以便染料进入细胞，网织红染液中的聚次甲基染料使RNA和DNA染色。由于红细胞和网织红细胞的RNA含量不同，所以可以将红细胞和网织红细胞区分出来；由于网织红细胞和白细胞DNA和RNA含量不同，可以将网织红细胞和白细胞区分出来。
3.2 网织红细胞试剂对检测结果的影响 大部分仪器网织红细胞检测是在单独的通道使用单独的试剂，因此网织红细胞试剂不会影响到其他结果的检测。该试剂的质量只会对网织红细胞的相关参数产生影响。
4 有核红细胞试剂（有核红细胞溶血素、染液）
4.1 有核红细胞试剂作用原理 有核红细胞溶血剂中表面活性剂可使成熟红细胞破碎，有核红细胞的核暴露，同时在白细胞膜上打孔。染液中的聚次甲基荧光染液进入白细胞和有核红细胞内对核酸进行染色。应用半导体激光束照射标本，根据侧向荧光和前向散射光信号的强弱即可辨认有核红细胞并进行计数。
4.2 有核红细胞试剂对检测结果的影响 有核红细胞染液的荧光性能（吸收光束的能力）、对细胞膜的渗透性、对靶细胞成分发出荧光的强度以及其化学稳定性都会影响到有核红细胞的检测结果。同网织红细胞、幼稚粒细胞一样，有核红细胞的试剂只会对有核红细胞的检测结果产生影响，不会影响到其他结果计数。
5 鞘 液
5.1 鞘液作用原理 大部分高端血液分析仪为了提高检测的精度，都应用了鞘流原理，主要应用的试剂就是鞘液。鞘流形式有单鞘流和多鞘流，目的都是使细胞呈一条直线经过检测部。在鞘流池中（一般分为前后鞘流池或者内外鞘流池）采用正压方式将鞘液注入，鞘液在鞘流池中形成固定方向的涡流，这个时候再把样本用正压的形式注入，那么所有的标本无一例外只能按流动方向流过鞘流池，这就形成鞘流方向，在这个方向上进行电阻计数或者吸光度计数或者光散射计数，就能充分保证正确计数每个细胞，并且保证足够的通过数量，还可以保证计数后的样本不会回流回来，由于有鞘流保护，样本会在鞘流的正中心通过计数管道或孔，因此不会出现偏差的干扰信号，可以保证每个细胞的游离。
5.2 鞘液对检测结果的影响 由于鞘液需要包裹着被检测样本经过检测部接受激光照射或者电阻抗法计数，因此鞘液的洁净度、吸光度、PH值、渗透压都要满足仪器的设计要求，否则都将会对仪器的检测结果产生影响。
5.3 白细胞分类试剂对检测结果的影响 从上文白细胞分类试剂作用原理我们可以看出，白细胞分类试剂种类繁多，而且起到的作用也各不相同，嗜碱溶血素只影响白细胞的总数和嗜碱细胞计数，对白细胞另外四类不会产生影响；嗜酸溶血素和染液共同作用于白细胞其他四分类，它们试剂质量有问题，则会造成白细胞分类不好或者不分类。
6 可以对血细胞进行等体积球形化处理的稀释液
有的血液分析仪还需要在稀释液中加入戊二醛和十二烷基硫酸钠等试剂，目的是计数前先对血细胞进行等体积球形化处理，这样计数时就可以避免因体积大小不同造成对血细胞计数造成的影响。
以上阐述了血液分析仪试剂的作用原理及对检测结果的影响，从中可以看出每一种试剂都有不同的作用，如何防止试剂对检测结果的影响，则需要我们在完善试剂质量控制体系，以及研发适用于配套试剂及仪器的标准物质方面多下功夫。
参考文献
[1] 晋淑媛，主编.现代医院检验科规范化管理与诊断治疗标准实用手册[S].
[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜，主编.全国临床检验操作规程[S].
【关键词】 血液分析仪；试剂；对检测结果的影响
文章编号：1004-7484（2013）-12-7747-01
1 血红蛋白素
顾名思义，血红蛋白素在五分类血液分析仪中的作用只是测量血红蛋白，检测原理同三分类分析仪血红蛋白检测原理一样，唯一不同的是，三分类血液分析仪溶血素同时检测白细胞总数和分类。由于五分类血液分析仪所用血红蛋白溶血素是在单独的通道进行检测，因此当血红蛋白溶血素出现问题时，只会影响血红蛋白的结果，对白细胞总数和分类没有任何影响。
2 白細胞分类试剂（溶血素、染液）
2.1 白细胞分类试剂作用原理 五分类血液分析仪由于各厂家白细胞分类原理不同，所用的试剂也不一样。主流五分类血液分析仪白细胞分类原理主要包括高频电导激光散射联合检测法、光散射和细胞染色联合检测法、多角度激光偏振光散射检测法等，但其方法不外乎光学法加荧光染色技术。所用试剂主要包括溶血素、染液。溶血素主要是嗜酸溶血素和嗜碱溶血素，染色则根据染色原理及染色目的不同，可分为化学染色、核酸染色、过氧化物酶染色等。现在主要从试剂方面对白细胞分类作用原理以及对检测结果的影响做以下阐述。
光学法+核酸染色。白细胞4分类通道：利用激光和流式细胞原理，当血细胞通过检测通道时，在流式通道内，稀释后的血液从样本口低速进入快速运动的鞘液流中，因为稀释后的血样和鞘液的流速不同，所以不会混合，形成一个直径30微米的液流使血液样本呈一条细线穿过检测通道，在激光的照射下激发出荧光，根据荧光强度的不同以及不同角度的散射光绘制成二维散点图，对包细胞进行分类。散点图纵坐标（Y轴）表示侧向荧光强度，反映核酸染料对DNA/RNA的染色强度，横坐标（X轴）表示侧向散射光强度，反映细胞的内容物。
2.2 白细胞计数和嗜碱性粒细胞通道 在嗜碱溶血素的作用下，红细胞和血小板破碎，除嗜碱性粒细胞外的其他白细胞变成裸核。这样裸核数量加上嗜碱性粒细胞数量即为白细胞总数，再根据激光照射后散射光的不同，区分出嗜碱细胞。Y轴表示前向散射光，反映细胞体积，X轴表示侧向散射光，反映细胞内容物。结合上文4分类通道对白细胞进行4分类，即可完成对WBC总数计数及对白细胞的五分类。
2.2.1 光学法+过氧化物酶染色 用过氧化物内染色剂对WBC进行初步区分，再结合嗜碱/核通道的差异裂解原理，最终将五种白细胞准确区分开来。过氧化物酶染色技术主要是利用白细胞胞浆内各成分对过氧化物酶活性的差异来区分，其中嗜酸性粒细胞对过氧化物酶活性为“+++”，中性粒细胞对过氧化物酶活性为“+++”，单核细胞对过氧化物酶活性为“++”，而淋巴细胞和嗜碱性粒细胞与过氧化物酶不反应，这样通过染色的方法可将嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞区分开；同时结合嗜碱/核通道的差异裂解原理可将嗜碱细胞和白细胞总数检测出来，这样白细胞总数减去嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞即可得出淋巴细胞数量，最终将五种白细胞准确区分开来。
2.2.2 光学法+化学染色 化学染色剂对细胞脂质和蛋白组分进行染色，在35度下进行孵育，对单核细胞的初级颗粒、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的特异颗粒进行不同程度的染色，同时对细胞的膜也进行不同程度的着色，由于淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞对染色剂的着色程度不同，在激光和氖灯的照射下，激发出的光强度也不同，每种细胞特定的细胞核形态和颗粒的结构造成光散射的强度不同，因此可以在散点图中同时得到嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的结果。同时在BASO/WBC检测池中，全血样品与嗜碱溶血素混合，在35度恒温下，溶解红细胞，并使除嗜碱性粒细胞外的其他白细胞变成裸核。细胞通过鞘流微孔，每个细胞产生与细胞体积成正比的电子脉冲，绘制出BASO/WBC直方图，依据阈值设定，区分出白细胞裸核和嗜碱性粒细胞，结合化学染色对白细胞进行4分类，即可完成对白细胞的5分类。
3 网织红细胞试剂（网织红细胞稀释液、染液）。
3.1 网织红细胞试剂作用原理 存在于网织红细胞稀释液中的表面活性剂使红细胞和白细胞肿胀并轻微损伤细胞膜以便染料进入细胞，网织红染液中的聚次甲基染料使RNA和DNA染色。由于红细胞和网织红细胞的RNA含量不同，所以可以将红细胞和网织红细胞区分出来；由于网织红细胞和白细胞DNA和RNA含量不同，可以将网织红细胞和白细胞区分出来。
3.2 网织红细胞试剂对检测结果的影响 大部分仪器网织红细胞检测是在单独的通道使用单独的试剂，因此网织红细胞试剂不会影响到其他结果的检测。该试剂的质量只会对网织红细胞的相关参数产生影响。
4 有核红细胞试剂（有核红细胞溶血素、染液）
4.1 有核红细胞试剂作用原理 有核红细胞溶血剂中表面活性剂可使成熟红细胞破碎，有核红细胞的核暴露，同时在白细胞膜上打孔。染液中的聚次甲基荧光染液进入白细胞和有核红细胞内对核酸进行染色。应用半导体激光束照射标本，根据侧向荧光和前向散射光信号的强弱即可辨认有核红细胞并进行计数。
4.2 有核红细胞试剂对检测结果的影响 有核红细胞染液的荧光性能（吸收光束的能力）、对细胞膜的渗透性、对靶细胞成分发出荧光的强度以及其化学稳定性都会影响到有核红细胞的检测结果。同网织红细胞、幼稚粒细胞一样，有核红细胞的试剂只会对有核红细胞的检测结果产生影响，不会影响到其他结果计数。
5 鞘 液
5.1 鞘液作用原理 大部分高端血液分析仪为了提高检测的精度，都应用了鞘流原理，主要应用的试剂就是鞘液。鞘流形式有单鞘流和多鞘流，目的都是使细胞呈一条直线经过检测部。在鞘流池中（一般分为前后鞘流池或者内外鞘流池）采用正压方式将鞘液注入，鞘液在鞘流池中形成固定方向的涡流，这个时候再把样本用正压的形式注入，那么所有的标本无一例外只能按流动方向流过鞘流池，这就形成鞘流方向，在这个方向上进行电阻计数或者吸光度计数或者光散射计数，就能充分保证正确计数每个细胞，并且保证足够的通过数量，还可以保证计数后的样本不会回流回来，由于有鞘流保护，样本会在鞘流的正中心通过计数管道或孔，因此不会出现偏差的干扰信号，可以保证每个细胞的游离。
5.2 鞘液对检测结果的影响 由于鞘液需要包裹着被检测样本经过检测部接受激光照射或者电阻抗法计数，因此鞘液的洁净度、吸光度、PH值、渗透压都要满足仪器的设计要求，否则都将会对仪器的检测结果产生影响。
5.3 白细胞分类试剂对检测结果的影响 从上文白细胞分类试剂作用原理我们可以看出，白细胞分类试剂种类繁多，而且起到的作用也各不相同，嗜碱溶血素只影响白细胞的总数和嗜碱细胞计数，对白细胞另外四类不会产生影响；嗜酸溶血素和染液共同作用于白细胞其他四分类，它们试剂质量有问题，则会造成白细胞分类不好或者不分类。
6 可以对血细胞进行等体积球形化处理的稀释液
有的血液分析仪还需要在稀释液中加入戊二醛和十二烷基硫酸钠等试剂，目的是计数前先对血细胞进行等体积球形化处理，这样计数时就可以避免因体积大小不同造成对血细胞计数造成的影响。
以上阐述了血液分析仪试剂的作用原理及对检测结果的影响，从中可以看出每一种试剂都有不同的作用，如何防止试剂对检测结果的影响，则需要我们在完善试剂质量控制体系，以及研发适用于配套试剂及仪器的标准物质方面多下功夫。
参考文献
[1] 晋淑媛，主编.现代医院检验科规范化管理与诊断治疗标准实用手册[S].
[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜，主编.全国临床检验操作规程[S].