【摘 要】
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实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是基因表达研究的常用方法,筛选达氏鲟(Acipenser dabryanus)稳定表达的内参基因,是保证该物种基因表达qRT-PCR分析结果准确性的基础.本研究选取了
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室,中国水产科学研究院长江水产研究所,湖北武汉 430223;农业农村部淡水生物多样性保护重点实验室,中国水产科学研究
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实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是基因表达研究的常用方法,筛选达氏鲟(Acipenser dabryanus)稳定表达的内参基因,是保证该物种基因表达qRT-PCR分析结果准确性的基础.本研究选取了达氏鲟β肌动蛋白(β-actin)、延伸因子1α(EF-1α)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L8(RPL8)、18S核糖体RNA(18S rRNA)、琥珀酸脱氢酶复合物A亚基(SDHA)和α微管蛋白(α-tubulin)共7个常用内参基因作为候选基因,利用geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder 4个软件分析这7个候选基因在达氏鲟成鱼不同组织和不同发育时期胚胎及性腺的表达稳定性.结果表明,7个候选内参基因的定量PCR引物均可获得特异性扩增产物和理想的扩增效率.在成鱼不同组织中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为EF-1α>β-actin>SDHA>RPL8>18S rRNA>α-tubulin>GAPDH;在不同发育时期胚胎中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为EF-1α>β-actin>SDHA>α-tubulin>18S rRNA>GAPDH>RPL8;在不同发育时期精巢中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为EF-1α>RPL8>β-actin>SDHA>18S rRNA>α-tubu-lin>GAPDH;在不同发育时期卵巢中,候选内参基因稳定性由高到低的顺序为RPL8>EF-1α>SDHA>β-actin=α-tubulin>18S rRNA>GAPDH.因此,达氏鲟成鱼不同组织、不同发育时期胚胎和精巢最稳定表达内参基因是EF-1α,而不同发育卵巢最稳定表达的内参基因是RPL8.本研究旨在为今后达氏鲟不同组织、不同发育时期胚胎及性腺的基因表达差异研究提供理论基础.
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