【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-365 (miR-365)和E74样受体4(ELF4)在宫颈癌中的表达、作用和临床意义.方法 采用实时定量PCR方法检测miR-365在正常宫颈组织(n=34)、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CIN
【机 构】
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华北理工大学研究生学院,河北唐山,063200;华北理工大学附属医院肿瘤外科,河北唐山,063000;唐山市工人医院妇二科,河北唐山,063000
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目的 探讨微小RNA-365 (miR-365)和E74样受体4(ELF4)在宫颈癌中的表达、作用和临床意义.方法 采用实时定量PCR方法检测miR-365在正常宫颈组织(n=34)、宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CIN Ⅰ)(n=31)、宫颈上皮内瘤变Ⅱ～Ⅲ级(CINⅡ～Ⅲ)(n=37)和宫颈鳞癌组织(SCC)(n=33)以及3种宫颈癌细胞系(C33A细胞、HeLa细胞、SiHa细胞)中的表达;生物信息学预测和荧光素酶报告基因检测验证miR-365对ELF4的靶向调控;Western blot方法检测ELF4在宫颈癌细胞中的表达;采用免疫组织化学方法检测不同病理宫颈组织中ELF4表达变化;CCK8实验检测不同时间点下过表达或抑制miR-365的表达对3种宫颈癌细胞株增殖的影响;分析miR-365和ELF4表达的相关性及其与SCC临床病理参数的关系.结果 实时荧光定量PCR结果表明,与正常宫颈组织相比,在CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ、SCC组织中miR-365的表达随着病理程度的加深逐渐下调;并且与正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)比较,miR-365在不同宫颈癌细胞系中表达均有不同程度的下调;报告基因分析结果证实ELF4是miR-365的直接靶点;Western blot实验结果显示,与正常宫颈上皮细胞比较,3种宫颈癌细胞系中ELF4的表达均升高(P =0.013,P=0.000,P=0.004);免疫组织化学实验证实ELF4在CIN和宫颈癌组织中的表达均上调.CCK8检测结果证实,在宫颈癌细胞中过表达或抑制miR-365表达显著抑制或促进细胞的增殖活性(P＜0.05).另外,在CINⅡ～Ⅲ和SCC组中,miR-365和ELF4的表达水平呈负相关性(CINⅡ～Ⅲ:r=-0.351,P=0.045;SCC:r=-0.349,P=0.035);临床资料分析显示miR-365和ELF4 mRNA的表达均与肿瘤大小、病理分级及临床分期相关(P均＜0.05).结论 miR-365在人宫颈癌细胞中表达下调,解除对下游靶分子ELF4的抑制作用,从而促进宫颈癌细胞的增殖和肿瘤的形成.
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