【摘 要】
：
目的 构建携带eap基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的重组EAP融合蛋白.方法 PCR法扩增金黄色葡萄球菌基因组DNA,回收、纯化的扩增产物与pMD18-T载体相连接得重组质粒pMD1
【机 构】
：
大庆医学高等专科学校基础医学部生物化学教研室,163312解放军二六一医院妇产科,北京,100094;
论文部分内容阅读
目的 构建携带eap基因的原核表达载体,诱导表达具有活性的重组EAP融合蛋白.方法 PCR法扩增金黄色葡萄球菌基因组DNA,回收、纯化的扩增产物与pMD18-T载体相连接得重组质粒pMD18-T-EAP,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,酶切鉴定;未酶切组作为对照组重组质粒pMD18-T-EAP和pET28a(+)表达载体分别用Nde Ⅰ和Xho Ⅰ限制性内切酶双酶切、连接,转化Ecoli BL21(DE3)感受态细胞,酶切鉴定;空载体作为对照组.用不同浓度(终浓度1、2、4、8 mmol/L)和不同诱导时间(1、2、3、4、5、6 h)的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对阳性重组菌进行表达优化,分别取E.coli上清液和沉淀做电泳分析.应用MagneHisTM蛋白纯化系统纯化重组EAP融合蛋白, 并通过薄层扫描测定蛋白质的浓度.结果 所获eap基因与GeneBank的基因序列同源性99%;氨基酸同源性达100%.重组质粒经IPTG诱导,阳性重组菌转化子均有表达:当吸光度(A)值等于0.6～0.8时,相对分子质量约70000处出现目的蛋白条带.破碎的重组菌pET28a-EAP上清液中目的蛋白条带较清楚,沉淀中几乎看不到.终浓度1 mmol/L为最佳蛋白表达工作浓度.IPTG诱导1h重组EAP融合蛋白有一定量的表达,随着时间的延长,表达量增加不明显,3 h时的表达量达最高,之后,蛋白表达量变化不明显.表达的重组EAP融合蛋白含量占全菌体蛋白的29.6%.结论 成功地克隆和表达了金黄色葡萄球菌重组EAP融合蛋白,为进一步研究以EAP蛋白作为免疫原预防和治疗由金黄色葡萄球菌引起的疾病奠定基础.
其他文献
本文简述孕前期、孕期、婴幼儿期、青春早期及青春期儿童单纯肥胖症的预防措施.
晕厥在临床中常见，多与心脏、代谢疾病以及神经反射有关。一般地说，与心脏和代谢疾病有关的晕厥依靠目前常用的临床检查技术多数可以明确原因，但与神经反射有关的晕厥诊断比较困
【摘要】 目的 对外伤性脾破裂的临床治疗方法进行总结和探讨。方法 对本院在2011年1月到2013年1月两年间收治的50例外伤性脾破裂患者的临床治疗资料进行回顾性的分析。结果 50例外伤性脾破裂患者中进行手术治疗的有35例，保守治疗（非手术治疗）的有15例。其中进行脾修补术的有10例，需要进行脾切除术的有13例，需要进行脾动脉结扎保脾手术的有3例。所有的患者经过治疗后均已痊愈，再经过1-2个月的护
目的 通过对食管癌患者术后留置胃管耐受性情况的观察,探讨心理干预对食管癌术后留置胃管非计划拔除的影响及意义.方法 120例食管癌术后患者按入院先后顺序随机分为A、B两组,
患者女性， 23岁。以突然抽搐30min为主诉于1998-06-19-10： 00就诊入院。 4d前因感冒服用复方新诺明全身出现皮疹、发痒，皮肤科诊断为过敏性药疹，用特非那丁60mg每日2次口服，共服9
【摘要】 目的 本文通过观察不同的相关案例对妇产科手术后泌尿系统损伤常见的原因及预防措施进行分析。结果 在妇产科妇科手术的案例总共有13380例，其中因为妇产科手术后造成泌尿系统损伤的占0.09%。在这些比例中因为采用开腹手术而发生的泌尿系统损伤的占0.1%，在这些恶化了的由3例是输尿管损伤，还有几例为良性的膀胱后壁损伤。结论 在妇产科手术后泌尿系统损伤后患者最常出现的是恶性的肿瘤手术，所以患者在
目的 了解湖北省村卫生室医务人员消毒知-信-行水平.方法 用自编调查问卷对湖北省627名村卫生室医务人员进行问卷调查.结果 627名村医消毒知-信-行总分平均(35.94±8.2)分其
目的 分析膝关节骨性关节炎术后护理中康复护理的应用效果.方法 选取2016年4月——2018年4月在我院接受手术治疗的140例膝关节骨性关节炎患者,随机将患者分为观察组和对照组,
【摘 要】目的：本研究主要就骨科护理过程中康复锻炼的临床应用情况展开分析讨论，以此来为骨科临床护理提供参考依据。方法：选择我院2009年12月—2010年12月所收治的40例骨折患者作为研究对象，所有患者在入院后均行手术治疗，术后在护理人员的指导下进行1—9周的康复锻炼，对所有患者在康复锻炼后的效果进行回顾性分析。结果： 通过对患者进行康复训练后，有38例患者的肢体功能完全恢复，2例患者的肢体功能
眼眶IgG4相关疾病具有一系列独特病理生理改变,主要表现为眼附属器组织有IgG4阳性淋巴浆细胞浸润,常伴血清IgG4升高,多双侧发病,累及多个系统,常有过敏性疾病史,并且有发展为眼眶淋巴瘤的可能.文中就其临床表现、病理特征与其他疾病的关系及治疗等方面展开综述。