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摘要：
目的：建立妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量。使用C18柱，甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相；检测波长为286nm。结果：线性关系良好，平均回收率为98.96%，RSD为0.78%。结论：本方法精密度高，分离度良好，可用于妇女痛经丸浸膏的质量控制。
关键词：高效液相色谱法丹酚酸B含量测定
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）05-0039-02
妇女痛经丸浸膏为妇女痛经丸提取物，处方由丹参 300g、延胡索（醋制）300g、五灵脂（醋炒）300g、蒲黄（炭）300g组成，制法为：取五灵脂100g，用水热浸，丹参加水煎煮二次，合并浸液及煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25（60℃），但由于原提取物标准过于简单，仅有鉴别项，无含量测定项，无法控制浸膏的质量，针对厂家提出的要求，增加浸膏的含量测定，在此，采用高效液相色谱法测定浸膏中丹参所含有效成份丹酚酸B的含量[1][2]。液相色谱法操作简便、精密度好、稳定、结果可靠，采用本法分离度较好，减少误差。本文采用高效液相色谱法测定妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量提高了药品质量标准，可控制提取物及成品的质量。
1仪器与试药
1.1仪器： LC-10A型高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10A检测器，威马龙色谱工作站。
1.2材料： 妇女痛经丸浸膏及缺阴性样品由安康制药有限公司提供，丹酚酸B对照品由中国药品生物制品鉴定所提供（供含量测定用）。甲醇、乙腈均为色谱纯，甲酸为分析纯，水为二次重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1色谱条件[1][3][4]： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相；检测波长为286nm，柱温25℃。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。
2.2对照品溶液的制备： 取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。对照品溶液HPLC色谱图见图一。
2.3样品溶液的制备： 取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶内，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。供试品溶液HPLC色谱图见图二。
2.4 标准曲线的制备： 精密吸取丹酚酸B对照品溶液（0.0551mg/ml）2.5、5、10、15、20μl进样，记录色谱，以峰面积为横坐标，以进样量（μg）为纵坐标作图，计算回归方程为：A=1828347.04C+15748.2195 （r=0.9999），结果表明丹酚酸B在0.13775μg～1.10200μg之间线性关系良好。
2.5精密度试验： 分别精密吸对照品溶液（0.0551mg/ml）各10μl，重复进样6次，记录色谱，计算，RSD为0.11%，说明有良好的精密度。
2.6重现性试验： 取一样品按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μl进样，记录色谱，计算，RSD为1.8%，说明有良好的重现性。
2.7加样回收率试验：采用加样回收，精密吸取已测定含量的样品0.1g（11.84mg/g），再加入丹酚酸B对照品适量，按正文所述色谱条件测定，计算回收率，结果见表一，丹酚酸B的回收率为98.96%，RSD为0.78%，说明本法有良好的回收率。
2.8空白试验： 按处方比例及生产制备方法制得阴性样品，按“样品溶液制备”项下制备阴性溶液，进样10μl，记录色谱图，结果样品色谱图在对照品色谱图出峰处无对应的峰，表明阴性样品溶液在丹酚酸B出峰处没有干扰峰。阴性样品溶液HPLC色谱图见图三。
2.9测定法： 分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3样品测定
取所有样品按样品溶液制备操作，分别吸取对照品溶液与样品溶液各10μl进样，按上述色谱条件测定，记录色谱，计算，结果见表二。
4讨论
本方中丹参为主药，而丹酚酸B为丹参药材中主要有效成分[5]，故选择丹酚酸B作为本品质量控制的成分。
在供试品溶液制备中，对回流提取和超声进行了比较，结果回流提取和超声提取没有显著差异，在此选用超声提取。对超声提取时间5～30 min进行了比较，结果表明提取10 min后，样品中丹酚酸B基本提取完全，故在此超声提取10 min。
经参阅资料报道及实验后，283nm处无杂质干扰且灵敏度较好，所以采用此波长。
流动相曾采用以甲醇-水-甲酸（55∶45∶2），甲醇-水（55∶45），乙腈-水-甲酸（43∶57∶0.2），乙腈-水（43∶57），甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相进行试验，在其他条件相同時，采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相，分离效果均较好。本实验结果表明，在此色谱条件下，采用高效液相色谱法测定妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量，方法简便，快速，重现性好。
参考文献
[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典2005年版一部[M].北京：化学工业出版式社，2010（一部）：71.
[2] 苗明三，李振国，陈隋清编.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：190.
[3] 王欢.丹酚酸B的含量测定方法研究进展 [J].江西中医药.2010（6）
[4] 许永，赵成.不同提取方法对丹参中丹酚酸B含量测定的影响 [J].安徽医药.2009（13）
[5] 陈发奎编.常用中草药有效成分含量测定[M].人民卫生出版社，1997：145.
目的：建立妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量。使用C18柱，甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相；检测波长为286nm。结果：线性关系良好，平均回收率为98.96%，RSD为0.78%。结论：本方法精密度高，分离度良好，可用于妇女痛经丸浸膏的质量控制。
关键词：高效液相色谱法丹酚酸B含量测定
【中图分类号】
R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）05-0039-02
妇女痛经丸浸膏为妇女痛经丸提取物，处方由丹参 300g、延胡索（醋制）300g、五灵脂（醋炒）300g、蒲黄（炭）300g组成，制法为：取五灵脂100g，用水热浸，丹参加水煎煮二次，合并浸液及煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25（60℃），但由于原提取物标准过于简单，仅有鉴别项，无含量测定项，无法控制浸膏的质量，针对厂家提出的要求，增加浸膏的含量测定，在此，采用高效液相色谱法测定浸膏中丹参所含有效成份丹酚酸B的含量[1][2]。液相色谱法操作简便、精密度好、稳定、结果可靠，采用本法分离度较好，减少误差。本文采用高效液相色谱法测定妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量提高了药品质量标准，可控制提取物及成品的质量。
1仪器与试药
1.1仪器： LC-10A型高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-10A检测器，威马龙色谱工作站。
1.2材料： 妇女痛经丸浸膏及缺阴性样品由安康制药有限公司提供，丹酚酸B对照品由中国药品生物制品鉴定所提供（供含量测定用）。甲醇、乙腈均为色谱纯，甲酸为分析纯，水为二次重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1色谱条件[1][3][4]： 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相；检测波长为286nm，柱温25℃。理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。
2.2对照品溶液的制备： 取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，即得。对照品溶液HPLC色谱图见图一。
2.3样品溶液的制备： 取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶内，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理10分钟，放冷，用70%甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液作为供试品溶液。供试品溶液HPLC色谱图见图二。
2.4 标准曲线的制备： 精密吸取丹酚酸B对照品溶液（0.0551mg/ml）2.5、5、10、15、20μl进样，记录色谱，以峰面积为横坐标，以进样量（μg）为纵坐标作图，计算回归方程为：A=1828347.04C+15748.2195 （r=0.9999），结果表明丹酚酸B在0.13775μg～1.10200μg之间线性关系良好。
2.5精密度试验： 分别精密吸对照品溶液（0.0551mg/ml）各10μl，重复进样6次，记录色谱，计算，RSD为0.11%，说明有良好的精密度。
2.6重现性试验： 取一样品按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μl进样，记录色谱，计算，RSD为1.8%，说明有良好的重现性。
2.7加样回收率试验：采用加样回收，精密吸取已测定含量的样品0.1g（11.84mg/g），再加入丹酚酸B对照品适量，按正文所述色谱条件测定，计算回收率，结果见表一，丹酚酸B的回收率为98.96%，RSD为0.78%，说明本法有良好的回收率。
2.8空白试验： 按处方比例及生产制备方法制得阴性样品，按“样品溶液制备”项下制备阴性溶液，进样10μl，记录色谱图，结果样品色谱图在对照品色谱图出峰处无对应的峰，表明阴性样品溶液在丹酚酸B出峰处没有干扰峰。阴性样品溶液HPLC色谱图见图三。
2.9测定法： 分别精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3样品测定
取所有样品按样品溶液制备操作，分别吸取对照品溶液与样品溶液各10μl进样，按上述色谱条件测定，记录色谱，计算，结果见表二。
4讨论
本方中丹参为主药，而丹酚酸B为丹参药材中主要有效成分[5]，故选择丹酚酸B作为本品质量控制的成分。
在供试品溶液制备中，对回流提取和超声进行了比较，结果回流提取和超声提取没有显著差异，在此选用超声提取。对超声提取时间5～30 min进行了比较，结果表明提取10 min后，样品中丹酚酸B基本提取完全，故在此超声提取10 min。
经参阅资料报道及实验后，283nm处无杂质干扰且灵敏度较好，所以采用此波长。
流动相曾采用以甲醇-水-甲酸（55∶45∶2），甲醇-水（55∶45），乙腈-水-甲酸（43∶57∶0.2），乙腈-水（43∶57），甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相进行试验，在其他条件相同時，采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相，分离效果均较好。本实验结果表明，在此色谱条件下，采用高效液相色谱法测定妇女痛经丸浸膏中丹酚酸B的含量，方法简便，快速，重现性好。
参考文献
[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典2005年版一部[M].北京：化学工业出版式社，2010（一部）：71.
[2] 苗明三，李振国，陈隋清编.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：190.
[3] 王欢.丹酚酸B的含量测定方法研究进展 [J].江西中医药.2010（6）
[4] 许永，赵成.不同提取方法对丹参中丹酚酸B含量测定的影响 [J].安徽医药.2009（13）
[5] 陈发奎编.常用中草药有效成分含量测定[M].人民卫生出版社，1997：145.