聚合酶链反应诱导HPV16E7 C端基因突变和突变蛋白在真核细胞表达

来源 :中华皮肤科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：renyuh

【摘要】

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【作者】

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左亚刚王家璧刘方闫言朱铁山马东来王宝玺

【机构】

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100730,北京,中国医学科学院、中国协和医科大学北京协和医院皮肤科,100730,北京,中国医学科学院、中国协和医科大学北京协和医院皮肤科,100730,北京,中国医学科学院、中国协和医科大学北京

【出处】

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中华皮肤科杂志

【发表日期】

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2005年38期

【关键词】

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聚合酶链反应重组体基因突变 HPV16E7C 真核细胞乳头状瘤病毒基因表达人乳头瘤病毒突变型阳性细胞

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目的聚合酶链反应(PCR)诱导人乳头瘤病毒(HPV16)早期基因E7 C端锌指结合基序基因突变,评价突变对抗原稳定性的影响.方法采用PCR技术对HPV16E7第58、91位氨基酸进行突变,构建野生型(pcDNA3.1/16E7)和突变型(pcDNA3.1/16ME7)重组体,对其蛋白表达进行比较.结果HPV16E7 C端第58、91位氨基酸突变后真核细胞表达成功,免疫荧光检测在质粒转染COS-7细胞24 h后两种重组体均有阳性细胞出现,但在48 h时突变型重组体阳性细胞消失.免疫印迹技术在24 h和48 h时,突变型重组体均未见阳性条带.结论 HPV16E7 C端锌指结构对维持蛋白稳定性起重要作用,突变后蛋白稳定性下降。

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