血红素加氧酶1诱导自噬减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤

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目的 探讨小鼠肝脏缺血再灌注(IR)后血红素加氧酶1(HO-1)表达与自噬的相关性以及对肝功能的影响.方法 建立对照组,IR组,HO-1诱导剂Hemin预处理后IR组(Hemin+ IR组)及HO-1抑制剂Znpp预处理后IR组(Znpp+ IR组).按不同灌注时间,IR组分为0、2、6、12、24、48、72 h组,Hemin+IR组和Znpp+ IR组分为0、2、6、12、24 h组.检测各组小鼠血清ALT、AST水平以评估肝功能;HE染色评估肝脏形态学改变,电镜检查观察肝脏组织内自噬小体情况;Western blot法检测HO-1及自噬相关蛋白LC3Ⅱ的蛋白水平.多组间比较采用方差分析,两组比较采用t检验,两两之间比较采用SNK-q检验.结果 IR组、Hemin+ IR组及Znpp+ IR组小鼠各时间点血清ALT、AST值均高于对照组,组间比较,差异有统计学意义(F =96.17,85.53,P<0.05);IR组缺血再灌注后12、24 h的血清ALT、AST值均高于Hemin+ IR组相应时间点的值,两者比较,差异有统计学意义(qALT=-14.46,-7.85;qAST=-12.98,-5.26,P<0.05);而低于Znpp +IR组相应时间点的值,两者比较,差异有统计学意义(qALT=4.25,4.94;qAST=4.98,3.53,P <0.05).HE染色示肝脏IR损伤在Hemin+ IR组较IR组和Znpp+ IR组显著改善,应用Suzuki分级进行半定量分析,对照组、IR 12 h组、Hemin+ IR 12 h组、Znpp+IR 12 h组肝脏IR损伤评分分别为:0.5±0.3、2.6±0.5、1.1±0.3、3.0±0.4,组间比较,差异有统计学意义(F =53.62,P<0.05).IR 12 h组分别与Hemin +IR 12 h组和Znpp +IR 12 h组比较,差异有统计学意义(q=10.67,14.02,P<0.05).电镜检查示:IR组小鼠肝脏自噬小体较对照组明显增加,在Hemin+ IR组增加更明显,而Znpp+ IR组较IR组有所减少,对照组、IR 12 h组、Hemin+ IR 12 h组、Znpp +IR 12 h组每10个视野的自噬小体平均数量分别为:(0.4±0.2)个、(1.8±0.6)个、(4.0±1.8)个、(0.7±0.5)个,组间比较,差异有统计学意义(F =21.35,P<0.05);IR 12 h组分别与Hemin +IR 12 h组和Znpp+ IR 12 h组比较,差异有统计学意义(q=6.05,-3.03,P<0.05).HO-1及自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达在IR组及Hemin+ IR组显著增加,且Hemin+ IR 6、12 h组HO-1蛋白相对表达量分别为0.64±0.17、0.51 ±0.12;LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为1.04±0.20、1.20±0.23,高于IR组相应时间点的蛋白相对表达量HO-1:0.45±0.08、0.17 ±0.03;LC3Ⅱ:0.58±0.04、0.95±0.14,两组比较,差异有统计学意义(tHO-1=4.03,4.69;tLC3Ⅱ=4.29,6.69,P<0.05);而Znpp+ IR 6、12 h组HO-1蛋白相对表达量分别为0.23 ±0.03、0.14±0.02;LC3Ⅱ蛋白相对表达量分别为0.35 ±0.04,0.49±0.14,低于IR组相应时间点的蛋白相对表达量,两组比较,差异有统计学意义(tHO-1=13.82,7.04;tLC3Ⅱ=7.21,4.03,P<0.05).结论 HO-1的表达与肝功能改善呈正相关,且其可能是通过诱导体内自噬来实现的。

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