【摘 要】
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目的 通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)干预制备豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)平滑肌细胞衰老模型,分析连接蛋白43(Cx43)与衰老相关蛋白P16和P21表达的相关性,探讨Cx43在细胞衰老中
【机 构】
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石河子大学医学院医学教学实验中心 石河子 832000;石河子大学医学院第一附属医院眼科 石河子 832000;石河子大学医学院第一附属医院耳鼻喉科 石河子 832000;石河子大学医学院生理学教研室
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目的 通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)干预制备豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)平滑肌细胞衰老模型,分析连接蛋白43(Cx43)与衰老相关蛋白P16和P21表达的相关性,探讨Cx43在细胞衰老中可能发挥的作用.方法 用贴壁法培养豚鼠SMA平滑肌细胞,应用免疫荧光技术检测平滑肌细胞标记物.实验分对照组、D-gal组和D-gal+缝隙连接激动剂AAP10干预组(AAP10组).CCK-8检测各组平滑肌细胞活性,确定D-gal干预浓度及时间;qRT-PCR检测各组Cx43 mRNA表达;Western blot检测各组Cx43、P16和P21的蛋白表达量;免疫荧光技术检测各组P16、P21的表达分布情况.结果 免疫荧光检测结果显示细胞肌动蛋白(α-SM-actin)阳性表达率达90％以上;CCK-8检测结果显示D-gal最佳干预浓度为30 mg/mL,干预时间为48 h;qRT-PCR检测发现D-gal组平滑肌细胞上Cx43 mRNA水平较对照组降低(P<0.01);AAP10组较D-gal组细胞Cx43 mRNA水平上调(P<0.01);Western blot检测发现D-gal组平滑肌细胞上Cx43蛋白水平较对照组降低(P<0.01);P16和P21蛋白表达较对照组升高(P<0.01);AAP10组较D-gal组细胞Cx43蛋白表达上调(P<0.01),P16、P21蛋白表达下调(P<0.01);免疫荧光结果显示P16和P21主要表达于细胞核上,P16和P21蛋白在D-gal组较对照组细胞荧光强度升高,AAP10组较D-gal组荧光强度下降(P<0.01).结论 上调Cx43的表达可以逆转D-gal诱导的SMA上衰老相关蛋白P16和P21的表达异常.提示Cx43可能参与细胞衰老过程,为延缓细胞衰老提供理论依据和可能的干预靶点.
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