【摘 要】
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用含丹参柯巴基焦磷酸合酶(Salvia miltiorrhizacopalyl diphosphate synthase,SmCPS)基因的重组质粒pET32CPS转化大肠杆菌BL21trxB(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果表明SmCPS
【机 构】
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中国中医科学院中药研究所,中国医学科学院北京协和医学院药物研究所
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用含丹参柯巴基焦磷酸合酶(Salvia miltiorrhizacopalyl diphosphate synthase,SmCPS)基因的重组质粒pET32CPS转化大肠杆菌BL21trxB(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果表明SmCPS基因在大肠杆菌中获得了表达;对影响可溶性表达的4个因素,即诱导温度、IPTG诱导浓度、诱导时宿主菌的密度(A600)和诱导时间进行了优化。结果发现在宿主菌A600达到1.0时加入0.4 mmol.L-1IPTG,在20℃诱导培养8 h表达的可溶性蛋白量最高,约占细胞总蛋白的35.6%。用Ni2+亲和色谱法纯化表达产物,纯化蛋白产率达到12.3 mg.L-1。将纯化蛋白免疫制备兔源SmCPS抗血清,ELISA测定效价为1∶24 300,且经Western blotting鉴定该抗体可特异性识别SmCPS抗原,获得了效价高、免疫反应性好的SmCPS多克隆抗体,为进一步从蛋白水平研究SmCPS表达与丹参酮类有效成分生物合成相关性提供了物质基础。
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