柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶基因的克隆、原核表达及酶活性分析

来源 :畜牧兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dd2010875

【摘要】

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旨在克隆柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶(EtDXR)基因,初步分析EtDXR的酶活性。根据EuPathDB数据库信息注释、拼接Etdxr基因序列,设计特异性引物扩增Etdxr基因,构

【作者】

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廖申权吴彩艳戚南山李娟吕敏娜张健騑谢明权孙铭飞

【机构】

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广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东省兽医公共卫生公共实验室

【出处】

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畜牧兽医学报

【发表日期】

：

2015年4期

【关键词】

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柔嫩艾美耳球虫 5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶克隆原核表达酶活性 Eimeria tenella 1-deoxy-D-xylulose-5-phospha

【基金项目】

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国家自然科学基金项目(31201902,31302087,31402186),广州市珠江科技新星项目(2012J2200059),广东省自然科学基金项目(S2013040015220),广东省科技计划项目(2011B050700007),广州市科技计划项目(2014J4100230),广东省农业科学院院长基金(201413)

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旨在克隆柔嫩艾美耳球虫5-磷酸脱氧木酮糖还原异构酶(EtDXR)基因,初步分析EtDXR的酶活性。根据EuPathDB数据库信息注释、拼接Etdxr基因序列,设计特异性引物扩增Etdxr基因,构建原核表达质粒pCold I-EtDXR,转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE及Western blot分析,纯化rEtDXR,对rEtDXR进行酶活性分析,测定pH和Mg2+离子浓度对酶活性的影响。结果显示,Etdxr基因完整编码序列为1 746bp,氨基酸序列具有与

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