目的建立一种可规模化纯化轮状病毒(Rotavirus,RV)的方法。方法以氯化铯密度梯度离心法(离心法)纯化RV作为对照,分析采用离心-微滤-超滤-层析法(模块法)纯化RV的可行性。透射电镜观察病毒形态;微量滴定法测定病毒的感染性滴度;Bradford法检测纯化前后病毒液的蛋白含量,计算蛋白回收率;以两种方法纯化的病毒免疫BALB/c小鼠,微量中和试验检测小鼠血清中和抗体滴度。结果模块法纯化的RV结构完整,感染性滴度可达(7.15±0.10)lgCCID50,可清除超过95%的蛋白质,蛋白回收率为(2.58±0.06)%,免疫小鼠可诱导中和抗体。模块法纯化的RV蛋白回收率、感染性滴度及诱导的小鼠中和抗体水平均显著高于离心法(P<0.05或P<0.01)。结论模块法可有效纯化RV,为RV灭活疫苗规模化纯化工艺的开发提供了实验依据。