【摘 要】
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为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入
【机 构】
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河南师范大学; 郑州职业技术学院; 河南省生物工程技术研究中心;
【基金项目】
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河南省科技创新团队项目;郑州市科技创新团队项目
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为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入细胞BL21(DE3),经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,表达蛋白分子质量约27ku,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达95%以上。将纯化的蛋白经HRP标记,初步建立ELISA捕获法,通过对24份标本检测和交叉反应试验,结果表明表达的抗原具有很好的反应原性和特异性,为建立丁型肝炎早期检测试剂盒提供材料。
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