【摘 要】
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目的:克隆IPO8基因5’端非编码序列,探讨其转录活性。方法:应用cDNA 5’末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,5’RACE)方法定位IPO8基因转录起始点;在此基础上针
【机 构】
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九江学院基础医学院药理教研室,江西省系统生物医学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金(81060075,81260140);江西省教育厅科学研究项目(GJJ12683)~~
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目的:克隆IPO8基因5’端非编码序列,探讨其转录活性。方法:应用cDNA 5’末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,5’RACE)方法定位IPO8基因转录起始点;在此基础上针对其5’端非编码区包括转录起始点在内的–3302~+134区域分段进行PCR扩增,将产物克隆入荧光素酶表达载体pGL3-Basic。经酶切鉴定后,将重组质粒与内参质粒pRL-TK共转染人骨肉瘤细胞Saos-2,用双荧光素酶活性检测以确定其转录活性。结果:成功确定IPO8基因转录起始位点,酶切结果证实IPO8基因5’端非编码区6条续减片段正确插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic。重组质粒转染Saos-2细胞后检测到荧光素酶的高表达(P<0.05)。结论:成功构建具有转录活性的IPO8启动子片段,为进一步研究IPO8表达调控机制奠定了基础。
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