【摘 要】
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目的建立敏感特异的仙台病毒(SeV)荧光定量PCR检测方法,并初步应用。方法将不同株SeV病毒序列进行比对,选择对保守区域设计合成引物。人工合成SeV基因组12 181～12 480 DNA序列
【机 构】
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北京理工大学; 中国食品药品检定研究院;
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目的建立敏感特异的仙台病毒(SeV)荧光定量PCR检测方法,并初步应用。方法将不同株SeV病毒序列进行比对,选择对保守区域设计合成引物。人工合成SeV基因组12 181～12 480 DNA序列,转入质粒中,作为仙台病毒质粒标准品,建立SYBR染料法荧光定量PCR方法,并对样本进行SeV测定。结果建立了特异性的检测SeV的SYBR荧光定量PCR方法,该方法对SeV最低检测限度为10 copies/μL。将所建立的实时荧光定量PCR方法用于40只SPF小鼠和58只裸鼹鼠的肺组织样本的检测,检测结果为仙台病毒核酸阴性;检测4只成年屏障环境饲养黄鼠肺组织和5只清洁级小鼠肺组织,检测结果为仙台病毒核酸阳性率100%。结论该研究建立的SYBR Green染料法荧光定量PCR方法能特异敏感地检测仙台病毒。
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