【摘 要】
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目的 以纯化的重组鸭坦布苏病毒（DTMUV）囊膜糖蛋白结构域3（ED3）蛋白作为免疫原，制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法 利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因，构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫后小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合，
【机 构】
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安徽农业大学动物科技学院预防兽医学科
【基金项目】
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国家自然科学基金（32072874）； 科技部国家重点研发计划（2018YFD0500100,2016YFD0500805）；
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目的 以纯化的重组鸭坦布苏病毒（DTMUV）囊膜糖蛋白结构域3（ED3）蛋白作为免疫原，制备ED3蛋白的单克隆抗体并研究其中和活性。方法 利用反转录PCR扩增DTMUV AH-F10株ED3基因，构建重组表达载体pET32a-ED3并转化至表达菌株Rosetta,诱导表达后利用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，取免疫后小鼠的脾细胞与Sp2/0细胞进行细胞融合，采取有限稀释法筛选杂交瘤细胞并大量制备单克隆抗体。利用Western blot法、间接免疫荧光法、 ELISA及分型试剂盒对单克隆抗体进行鉴定并通过病毒中和试验检测抗体中和效价。结果 成功表达DTMUV ED3蛋白，并制备3株ED3蛋白的鼠源单克隆抗体B9D10C7、 B9D7B8G10、 B9D7B8F11,其亚型分别为IgG1、 IgG2a、 IgG2b,腹水间接ELISA检测抗体效价均达到1∶51 200,且能够识别DTMUV的E蛋白，具有一定的中和活性。结论 获得3株特异性强、敏感性高的DTMUV ED3的单克隆抗体。
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