【摘 要】
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目的 建立一种易于操作,能够获得高纯度、高活力C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养体系,并对分离提取的细胞进行纯化鉴定.方法 无菌环境下取E12.5天胎鼠皮肤,剪碎至1
【机 构】
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南通大学实验动物中心,南通226001南通大学实验动物中心,南通226001;南通大学比较医学研究所,南通226001
【出 处】
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2014第十一届中国实验动物科学年会
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目的 建立一种易于操作,能够获得高纯度、高活力C57BL/6小鼠胚胎成纤维细胞的分离培养体系,并对分离提取的细胞进行纯化鉴定.方法 无菌环境下取E12.5天胎鼠皮肤,剪碎至1 mm2大小,均匀铺于皿中,用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养基连续培养4d,以胰蛋白酶消化-再贴壁法分离纯化目的细胞,分别以NIH3T3、角质形成性细胞作为阳性与阴性对照,采用免疫荧光、Western blot检测Vimentin及Keratin的表达情况,以鉴定所分离细胞及其纯度.结果 组织块培养24 h即可见成纤维样细胞爬出,至培养96 h细胞生长爬满全皿,经胰酶消化,筛网过滤再贴壁接种后能够获得形态均一、活力旺盛,具有成纤维细胞形态学特征的目的细胞,免疫荧光鉴定结果发现所分离细胞Vimentin表达阳性率为100％,而Keratin表达阳性率为0,Western blot检测发现,与阴性对照角质形成性细胞相比,C57BL/6分离成纤维细胞和NIH3T3细胞均高表达Vimentin,且差异极显著,有统计学意义.结论 以El2.5胎鼠皮肤为材料建立成纤维细胞分离培养体系,所分离培养的成纤维细胞具有更高的细胞活力和细胞纯度.
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