【摘 要】
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Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(
【机 构】
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合成及天然功能性分子化学教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.20705028);陕西省重点实验室项目(05JS60)
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Flt3配体(FL)是一类具有促进早期造血功能的细胞因子,在促进造血细胞生长发育及造血动员方面具有重要的临床应用价值。为了用基因工程方法获得大量用于临床和研究的重组人FL(rhFL)蛋白质,本文对在大肠杆菌(E.coli)中表达得到的Flt3配体的包涵体进行回收、洗涤,溶解于8mol/L脲后在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)柱上进行rhFL包涵体的复性与同时纯化,并对其保留特征和复性规律进行了研究。结果表明,在连续进样、变性蛋白质质量浓度为8.51g/L、固定相选用端基为PEG800、流动相添加4mol/L脲、1.8mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)和0.3mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSH)、pH7.0的优化条件下,复性与同时纯化rhFL包涵体的质量回收率为36.9%,纯度达94.5%以上。本文仅用一步HPHIC法成功地复性与同时纯化了rhFL蛋白质,为获得高活性的rhFL产品奠定了一定的工作基础。
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