探讨亚砷酸钠(NaAsO2)所致恶性转化人肝细胞L-02分泌的外泌体微小RNA(miR)-191对正常人肝细胞L-02增殖的影响。
方法分别使用2 μmol/L NaAsO2恶性转化L-02细胞的培养液、提取的外泌体,处理正常的野生型L-02细胞(受体L-02细胞);利用转染试剂LipofectamineTM 2000将anti-miR-191和对照anti-miR-NC分别转染至恶性转化L-02(T-L-02)细胞,同时设置未处理组。采用实时荧光定量PCR检测miR-191表达;CCK-8法检测细胞增殖。
结果与同代对照L-02细胞培养液(CM)处理组相比,NaAsO2恶性转化细胞培养液(T-CM)处理组显著促进受体L-02细胞增殖[(207 ± 24)%比(105 ± 21)%,t= 5.462,P < 0.01]和miR-191表达[(206 ± 25)%比(105 ± 20)%,t= 4.116,P < 0.05]。来源于CM的不同浓度外泌体未引起受体L-02细胞增殖和miR-191表达明显变化(F= 2.213、2.213,P均> 0.05);来源于T-CM的不同浓度外泌体引起受体L-02细胞增殖和miR-191表达明显增高,且存在一定剂量-效应关系(F= 10.910、4.553,P < 0.01或< 0.05)。20、50 mg/L T-CM来源的外泌体处理的受体L-02细胞相对增殖率高于同浓度CM来源的外泌体处理组[(160 ± 32)%比(102 ± 8)%,(203 ± 7)%比(111 ± 5)%,t= 2.999、18.750,P < 0.05或< 0.01],10、20、50 mg/L T-CM来源的外泌体处理的受体L-02细胞miR-191表达高于同浓度CM来源的外泌体处理组[(166 ± 13)%比(113 ± 9)%,(211 ± 55)%比(102 ± 8)%,(206 ± 31)%比(105 ± 6)%,t= 5.611、3.357、5.509,P < 0.05或< 0.01]。anti-miR-191处理组T-L-02细胞及其分泌的外泌体miR-191表达[(39 ± 10)%、(30 ± 19)%]显著低于未处理组和anti-miR-NC处理组[(100 ± 0)%、(106 ± 17)%,(100 ± 0)%、(104 ± 17)%,P均< 0.01]。未处理组外泌体促进受体L-02细胞相对增殖率升高[(395 ± 31)%比(100 ± 0)%,t= 16.290,P < 0.01],且miR-191表达显著增高[(208 ± 47)%比(100 ± 0)%,t= 4.015,P < 0.05];而anti-miR-191处理组外泌体处理受体L-02细胞的相对增殖率和miR-191表达[(157 ± 19)%、(103 ± 44)%]显著低于未处理组和anti-miR-NC处理组[(395 ± 31)%、(411 ± 55)%,(208 ± 47)%、(197 ± 37)%,P < 0.01或< 0.05]。
结论NaAsO2恶性转化L-02细胞分泌的外泌体miR-191促进正常人肝L-02细胞增殖。