【摘 要】
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目的:探讨17β-雌二醇(17β-estraial,E2)对大鼠结肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC) RhoA/ROCK通路的影响.方法:体外分离培养Sprague-Dawley (SD)大鼠结肠SMCs.细胞免疫
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院消化科,江苏南京,210029
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目的:探讨17β-雌二醇(17β-estraial,E2)对大鼠结肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC) RhoA/ROCK通路的影响.方法:体外分离培养Sprague-Dawley (SD)大鼠结肠SMCs.细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体(ER)α与α肌动蛋白(α-SMA)共表达.不同浓度和不同时间E2刺激后,以反转录实时荧光定量qRT-PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达.不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后,Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况.观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2(BSA-E2)、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用.构建ERα、ERβ的siR-NA,观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响.结果:细胞免疫荧光示结肠SMC上ROCK1与α-SMA共表达.50 nmol/L E2刺激24h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达(P＜0.05).Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白p-MYPT1、p-CPI17、p-MLC表达.E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组(P＜ 0.05).ERα siRNA组可上调RhoA、ROCK1表达(P＜0.05).结论:大鼠结肠SMC上存在ROCK1,E2可抑制RhoMROCK通路表达,该作用由雌激素α受体介导.
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