【摘 要】
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目的：研究身痛逐瘀汤含药血清对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨细胞氧化应激及凋亡的保护作用。方法：50只雄性大鼠分别灌胃给予生理盐水，身痛逐瘀汤低、中、高剂量(1.73、3.46、6.92 g·kg-1)和阳性药物(硫酸氨基葡萄糖胶囊0.3 g·kg-1)，连续给药2周后收集血清。① 构建KOA模型，分离软骨细胞，随机分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药物组。② 软骨细胞培养
【基金项目】
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2019年河南省中医药科学研究专项项目（2019JDZX095）； 全国中医临床特色技术传承人才项目（国中医药人教函[2019]36号）；
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目的：研究身痛逐瘀汤含药血清对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨细胞氧化应激及凋亡的保护作用。方法：50只雄性大鼠分别灌胃给予生理盐水，身痛逐瘀汤低、中、高剂量(1.73、3.46、6.92 g·kg-1)和阳性药物(硫酸氨基葡萄糖胶囊0.3 g·kg-1)，连续给药2周后收集血清。① 构建KOA模型，分离软骨细胞，随机分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清低、中、高剂量组及阳性药物组。② 软骨细胞培养过程中添加AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）抑制剂Compound C (10 μmol·L-1)，分为正常组、模型组、身痛逐瘀汤含药血清组、Compound C +身痛逐瘀汤含药血清组。EdU染色检测细胞增殖；原位末端标记法测定凋亡；DCFH-DA探针检测活性氧（ROS）水平；比色法测定谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量；荧光定量PCR检测基质金属蛋白酶3（MMP-3）、MMP-13、II型胶原蛋白（Col II）和聚集蛋白聚糖（AGGRECAN）mRNA表达水平；免疫印迹检测p-AMPK及沉默信息调节因子1（Sirt1）蛋白表达。结果：与正常组比较，模型组软骨细胞增殖率、GSH活性、Col II与AGGRECAN mRNA表达、p-AMPK和Sirt1蛋白水平降低（P＜0.01），而ROS水平、MDA含量、TUNEL阳性细胞率、MMP-3与MMP-13 mRNA表达升高（P＜0.01）。与模型组比较，身痛逐瘀汤含药血清能提高KOA大鼠软骨细胞中EdU阳性细胞数、GSH活性、Col II和AGGRECAN mRNA表达水平、p-AMPK和Sirt1蛋白水平（P＜0.05， P＜0.01），而TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA表达水平则明显降低（P＜0.05， P＜0.01）。与身痛逐瘀汤含药血清组比较，Compound C + 身痛逐瘀汤含药血清组细胞p-AMPK和Sirt1蛋白表达、GSH活性、Col II和AGGRECAN mRNA水平明显降低（P＜0.01），TUNEL阳性细胞率、ROS水平、MDA含量、MMP-3和MMP-13 mRNA水平显著升高（P＜0.01）。结论：身痛逐瘀汤含药血清能减弱KOA大鼠软骨细胞氧化损伤，降低细胞凋亡，其保护作用可能与激活AMPK/Sirt1信号通路有关。
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