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摘要：
目的：建立HPLC法测定清胰利胆颗粒中丹皮酚的分析方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70），流速为1mL·min-1，柱温为30℃；检测波长：284nm。进样量：10μL。结果：方法学考察表明，丹皮酚进样量在 0.02278～0.3417 μg范围内具有良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为 100.24%，RSD为 0.59 %（n =7）。 结论：该方法准确、简便、快速，可用于清胰利胆颗粒中丹皮酚的含量测定方法。
关键词：丹皮酚； HPLC； 含量测定
Content determination of Paeonol qingyilidan particles by HPLC
Li Hongxia （Guangxi Hechi Institute for Food and Drug Control Guangxi Hechi 547000）
Abstract：
Objective： To analysis method for determination of Paeonol qingyilidan particles in HPLC method. Methods： The chromatographic column was Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μ m ）， mobile phase was -0.1% phosphoric acid solution （ 30：70 ）， the flow rate was 1mL·min-1， column temperature was 30 ℃； the detection wavelength： 284nm. Sample size： 10μL.Results： the methodological study showed that， paeonol injection has a good linear relationship in the range of 0.02278～0.3417μg （ r = 0.9999 ）， the average recovery rate was100.24%， RSD was 0.59%（ n =7）Conclusion：. the method is accurate， simple， rapid method for the determination of content， can be used for paeonol qingyilidan particles in.
Key words：Paeonol； HPLC； Content determination
【中图分类号】
R194 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0007-01
1 引言
清胰利胆颗粒由牡蛎、姜黄、金银花、柴胡、大黄、牡丹皮等八味药组成。该药品收载于《中药成方制剂》第四册，具有行气解郁，活血上痛，舒肝利胆，解毒通便。用于急性胰腺炎，急性胃炎等症[1]。处方中牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清热凉血，活血化瘀等功效，主要含有酚酸类成分和具有笼状结构的单萜类成分等[2]。清胰利胆颗粒质量标准中尚未收载含量测定方法，为进一步完善其质量标准，有效地控制其质量，参考有关文献，建立了HPLC对清胰利胆颗粒中丹皮酚含量测定方法。实验结果表明，该方法快速、简便、准确，可作为清胰利胆颗粒含量测定方法。
2 材料、仪器与试药
2.1 材料：清胰利胆颗粒（吉林巨仁堂药业股份有限公司，批号：110102）；丹皮酚对照品 （中国药品生物制品检定所，批号：110708-200505）。
2.2 仪器： Waters2487-1525-717高效液相色谱仪；超声波清洗仪
2.3 试药：乙腈为色谱纯；水为纯净水；其他试剂、试药均为分析纯。
3 方法与结果
3.1 色谱条件： 色谱柱：Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）[3]；流速为1mL·min-1；柱温为30℃；检测波长：284nm。进样量：10μL。
3.2 对照品溶液的制备： 精密称取11.39mg丹皮酚对照品，用甲醇溶液先定容至25ml量瓶中，再从中吸取5mL至100mL量瓶，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（对照品浓度为：22.87ug·mL-1）。
3.3 供试品溶液的制备： 供试品溶液的配制：精密称取4g样品置25mL量瓶中，加甲醇至容量的2/3，超声处理30min，取出、放冷，用甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
3.4 阴性对照溶液的制备： 制备不含丹皮酚的样品，同法制成阴性对照品溶液。
3.5 测定：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，用面积归一法计算含量，即得。
3.6 系统适用性试验： 在上述色谱条件下，丹皮酚的保留时间大约为12分钟，理论塔板数按丹皮酚峰计不低于5000，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而阴性对照溶液则无相应的峰，证明阴性对照品不干扰测定，含量测定专属（见图1）。
〖XCC4.TIF〗
图1 清胰利胆颗粒HPLC图
a.丹皮酚对照品； b.清胰利胆颗粒样品； c.阴性对照
3.7 线性关系考察：精密吸取3.2项下对照品溶液1、2、3、5、7、15μl，各注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标、丹皮酚的进样量（μg）为横坐标，得回归方程为y=4500000x–8979.7（r=0.9999）。结果表明，丹皮酚进样量在0.02287～0.34305μg范围内，与峰面积呈良好线性关系。结果见表1和图2。
5 结论与讨论
5.1 结论：测定结果表明，本法回收率好，精密度、重现性高。样品处理简便，分析快速的优点，可用作进一步完善清胰利胆颗粒的质量控制指标。
5.2 讨论
5.2.1 提取时间优化：取4份本品研细约4.0g，分别精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇至容量的2/3，分别超声提取15、30、45、60min，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件测定丹皮酚含量分别为22.37、39.54、36.92、33.78μg·g-1。结果超声提取30min时含量较高，故选择用甲醇（超声提取30min）为最佳提取条件。
5.2.2 测定波长的选择：取丹皮酚对照品溶液，丹皮酚在200～300nm波长范围进行扫描，结果丹皮酚在284nm处有最大吸收，因此确定检测波长为284nm。
5.2.3 流动相的选择：采用乙腈-0.1%磷酸溶液系统为流动相，调整不同的比例，结果显示：乙腈-0.1%磷酸溶液的比例为30∶70时，主峰形较对称，分离效果好，不拖尾，故选此比例为流动相。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第四册[S].卫生部药典委员.1991：186.
[2]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2010版第一部[S].北京：化学工业出版社，2010：160.
[3]华剑，武超.HPLC法测定桂枝茯苓胶囊中肉桂酸、桂皮醛和丹皮酚的含量[J].安徽医药，2006，10（1）：1009-6469.
目的：建立HPLC法测定清胰利胆颗粒中丹皮酚的分析方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70），流速为1mL·min-1，柱温为30℃；检测波长：284nm。进样量：10μL。结果：方法学考察表明，丹皮酚进样量在 0.02278～0.3417 μg范围内具有良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为 100.24%，RSD为 0.59 %（n =7）。 结论：该方法准确、简便、快速，可用于清胰利胆颗粒中丹皮酚的含量测定方法。
关键词：丹皮酚； HPLC； 含量测定
Content determination of Paeonol qingyilidan particles by HPLC
Li Hongxia （Guangxi Hechi Institute for Food and Drug Control Guangxi Hechi 547000）
Abstract：
Objective： To analysis method for determination of Paeonol qingyilidan particles in HPLC method. Methods： The chromatographic column was Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μ m ）， mobile phase was -0.1% phosphoric acid solution （ 30：70 ）， the flow rate was 1mL·min-1， column temperature was 30 ℃； the detection wavelength： 284nm. Sample size： 10μL.Results： the methodological study showed that， paeonol injection has a good linear relationship in the range of 0.02278～0.3417μg （ r = 0.9999 ）， the average recovery rate was100.24%， RSD was 0.59%（ n =7）Conclusion：. the method is accurate， simple， rapid method for the determination of content， can be used for paeonol qingyilidan particles in.
Key words：Paeonol； HPLC； Content determination
【中图分类号】
R194 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0007-01
1 引言
清胰利胆颗粒由牡蛎、姜黄、金银花、柴胡、大黄、牡丹皮等八味药组成。该药品收载于《中药成方制剂》第四册，具有行气解郁，活血上痛，舒肝利胆，解毒通便。用于急性胰腺炎，急性胃炎等症[1]。处方中牡丹皮为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。具有清热凉血，活血化瘀等功效，主要含有酚酸类成分和具有笼状结构的单萜类成分等[2]。清胰利胆颗粒质量标准中尚未收载含量测定方法，为进一步完善其质量标准，有效地控制其质量，参考有关文献，建立了HPLC对清胰利胆颗粒中丹皮酚含量测定方法。实验结果表明，该方法快速、简便、准确，可作为清胰利胆颗粒含量测定方法。
2 材料、仪器与试药
2.1 材料：清胰利胆颗粒（吉林巨仁堂药业股份有限公司，批号：110102）；丹皮酚对照品 （中国药品生物制品检定所，批号：110708-200505）。
2.2 仪器： Waters2487-1525-717高效液相色谱仪；超声波清洗仪
2.3 试药：乙腈为色谱纯；水为纯净水；其他试剂、试药均为分析纯。
3 方法与结果
3.1 色谱条件： 色谱柱：Agilent TC-C18（4.6×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）[3]；流速为1mL·min-1；柱温为30℃；检测波长：284nm。进样量：10μL。
3.2 对照品溶液的制备： 精密称取11.39mg丹皮酚对照品，用甲醇溶液先定容至25ml量瓶中，再从中吸取5mL至100mL量瓶，用甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（对照品浓度为：22.87ug·mL-1）。
3.3 供试品溶液的制备： 供试品溶液的配制：精密称取4g样品置25mL量瓶中，加甲醇至容量的2/3，超声处理30min，取出、放冷，用甲醇稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。
3.4 阴性对照溶液的制备： 制备不含丹皮酚的样品，同法制成阴性对照品溶液。
3.5 测定：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，用面积归一法计算含量，即得。
3.6 系统适用性试验： 在上述色谱条件下，丹皮酚的保留时间大约为12分钟，理论塔板数按丹皮酚峰计不低于5000，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而阴性对照溶液则无相应的峰，证明阴性对照品不干扰测定，含量测定专属（见图1）。
〖XCC4.TIF〗
图1 清胰利胆颗粒HPLC图
a.丹皮酚对照品； b.清胰利胆颗粒样品； c.阴性对照
3.7 线性关系考察：精密吸取3.2项下对照品溶液1、2、3、5、7、15μl，各注入液相色谱仪，分别测定峰面积积分值，以峰面积为纵坐标、丹皮酚的进样量（μg）为横坐标，得回归方程为y=4500000x–8979.7（r=0.9999）。结果表明，丹皮酚进样量在0.02287～0.34305μg范围内，与峰面积呈良好线性关系。结果见表1和图2。
5 结论与讨论
5.1 结论：测定结果表明，本法回收率好，精密度、重现性高。样品处理简便，分析快速的优点，可用作进一步完善清胰利胆颗粒的质量控制指标。
5.2 讨论
5.2.1 提取时间优化：取4份本品研细约4.0g，分别精密称定，置25ml量瓶中，加入甲醇至容量的2/3，分别超声提取15、30、45、60min，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件测定丹皮酚含量分别为22.37、39.54、36.92、33.78μg·g-1。结果超声提取30min时含量较高，故选择用甲醇（超声提取30min）为最佳提取条件。
5.2.2 测定波长的选择：取丹皮酚对照品溶液，丹皮酚在200～300nm波长范围进行扫描，结果丹皮酚在284nm处有最大吸收，因此确定检测波长为284nm。
5.2.3 流动相的选择：采用乙腈-0.1%磷酸溶液系统为流动相，调整不同的比例，结果显示：乙腈-0.1%磷酸溶液的比例为30∶70时，主峰形较对称，分离效果好，不拖尾，故选此比例为流动相。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第四册[S].卫生部药典委员.1991：186.
[2]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典2010版第一部[S].北京：化学工业出版社，2010：160.
[3]华剑，武超.HPLC法测定桂枝茯苓胶囊中肉桂酸、桂皮醛和丹皮酚的含量[J].安徽医药，2006，10（1）：1009-6469.