【摘 要】
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T4多核苷酸激酶(T4 polynucleotide kinase,T4 PNK))是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化.核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关.因此构建一种灵敏的T4 PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义.本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4 PNK活性的策略,拟利用T4 PNK可将DN
【机 构】
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聊城大学 化学化工学院,山东 聊城 252059
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T4多核苷酸激酶(T4 polynucleotide kinase,T4 PNK))是5′-激酶家族的主要成员,可以将三磷酸腺苷(ATP)的γ位点磷酸基团转移到单链或双链DNA/RNA、寡核苷酸或具有3′-磷酸基团的单核苷酸的5′-羟基进行催化.核酸中5′-羟基末端的磷酸化在DNA重组、复制和损伤中起着重要作用,与恶性疾病的生成发展密切相关.因此构建一种灵敏的T4 PNK的检测方法对于许多疾病早期治疗具有重要意义.本文提出基于λ核酸外切酶驱动荧光减弱式检测T4 PNK活性的策略,拟利用T4 PNK可将DNA的5′端由羟基化变为磷酸化的特点,磷酸化DNA能被λ核酸外切酶(λ-exonuclease)特异性识别和切割的特点降解底物双链DNA,导致与荧光染料SGΙ键合位点急剧减少,荧光信号输出由“on”模式切换到“off”模式,荧光强度大大减少.因此,可利用荧光减弱的程度来实现对T4 PNK的免标记荧光定量检测.
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