【摘 要】
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为了实现蚓激酶在真核细胞的高效稳定表达 ,人工合成了全长 849bp ,不含罕用密码子的蚓激酶F Ⅲ 1cDNA序列 ,并以其为目的基因 ,构建以山羊β 酪蛋白启动子为上游调控序列的
【机 构】
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中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所
【基金项目】
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国家“8 63”计划资助项目 ( 2 0 0 2AA2 0 665 3 )
论文部分内容阅读
为了实现蚓激酶在真核细胞的高效稳定表达 ,人工合成了全长 849bp ,不含罕用密码子的蚓激酶F Ⅲ 1cDNA序列 ,并以其为目的基因 ,构建以山羊β 酪蛋白启动子为上游调控序列的乳腺组织特异性表达载体pBLK和重组逆转录病毒表达载体pLN bCP LK。质粒pBLK 40 0 μg直接注入稳定泌乳期奶山羊乳腺 ,以纤维蛋白平板溶圈法 (FAPA)检测奶样纤溶活性。结果显示 ,注射后 3～ 60h ,奶样有明显纤溶活性 ,其中 6～ 9h活性最高。脂质体介导质粒pLN bCP LK转染PA31 7细胞系 ,5 0 0mg LG41 8筛选后获得 4株高产毒细胞系 ,产毒滴度达 1× 1 0 4～ 1× 1 0 5CFU ml水平。产毒细胞上清 1 0ml直接注入临产前两周的山羊乳腺 ,隔日以等量再注 1次 ,产羔后其奶样即有明显纤溶活性 ,注后第 45日纤溶活性仍无明显降低
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