应用离心方法提高杆状病毒对哺乳动物细胞转导实验效率

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rylove006
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
重组杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体已获得了日益广泛的应用。为进一步提高转导实验的效率,本研究利用已构建的带有CMV启动子-增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达盒的重组杆状病毒BacV-CMV-EGFPA,在CV-1细胞中探索了应用离心方法提高转导实验效率的可行性。结果显示离心方法可显著提高单位时间内重组杆状病毒对哺乳动物细胞的转导效率,同时不会对靶细胞造成损伤。通过对离心时间、离心后孵育时间、病毒上清的稀释缓冲液的进一步摸索优化,结果显示病毒上清以PBS为稀释缓冲环境室温600g水平离心1h即可获得高水平的转导效率,优于在PBS环境中27℃孵育8h的效果。该方法可在获得高转导效率的同时显著缩短实验时间,具有快捷、高效、低损伤的特点,可作为一种常规操作方法用于日常实验。本研究进一步应用该方法对多种不同来源和类型的哺乳动物细胞株进行基因转导,结果显示该方法可适用于多数不同种属和组织来源的哺乳动物细胞,其中对贴壁细胞的效果最为显著。
其他文献
民国时期,各类边疆研究机构兴起,极大地推动了边疆学术的发展,适应了新时期国人急于了解边疆实况及寻求发展方略的需求。民国时期的边疆学术趋于群体性和多元化,在研究活动组
杭州湾是钱塘江河口区外海滨部分 ,其水动力条件、泥沙运移、沉积过程和地貌演变复杂。根据杭州湾区域遥感影像和地理地形等资料 ,通过综合分析研究 ,探讨了杭州湾南、北两岸
空调负荷在我国绝大多数地区电力系统高峰时期占比较大,是造成负荷尖峰的主要原因之一,其中中央空调单体容量大,且便于集中控制,是参与负荷调节的优质资源,现实中对空调的调
随着大学生医保在福州市各高校的实施,大学生作为一个特殊群体从该政策中获益良多。但由于实施时间较短,仍存在着一些问题。笔者对福州市大学生基本医疗保险在福建农林大学金
对于性别的关注是教育研究与实践的重要领域,正确地认识性别与教育的关系,有助于更好地实现教育价值,推进教育公平,提升教育质量。具体可从"教材中的性别问题""基础教育中的
患者男,26岁,2014年7月无明显诱因出现颈、胸、背部疼痛,有上肢疼痛、麻木、无力,伴双下肢行走时乏力,症状逐渐加重,无法自主行走。于2014年7月28日至我院,门诊颈椎MRI示:颈6椎体下缘
"互联网+"视域下的创新创业教育给高职学生的创业活动带来了机遇,而创新创业教育融入高职思政课中,既是近年来政府所倡导的提升高职学生综合素质和就业率的既定导向与必然趋
<正> 在马王堆三号汉墓出土的十四种医书中,记有方、药的著作有四种。其中《五十二病方》的撰年据初步确认要早在战国时期成书的《黄帝内经》之前,约在春秋战国之际。《养生