人芳香族氨基酸脱羧酶基因的克隆及测序

来源 :中山医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenenm0702
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[目的]用RT-PCR法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因全序列,并建立优化方法.[方法]从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA,自行设计引物,采用两步RT-PCR法扩增出长约1550bp的基因片断,凝胶回收后与高效克隆PCR产物的新型载体T-载体连接,并转化入大肠杆菌,通过蓝白斑反应筛选出重组体,质粒提取后进行重组体的酶切鉴定及基因测序.[结果]BamHⅠ和HindⅢ酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接,基因测序证实了所克隆的片断为人AADC基因.[结论]本实验通过对引物,Taq酶的选
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