论文部分内容阅读
目的
研究腹膜型Ⅰ~Ⅱ期子宫内膜异位症(endometriosis，EMS)患者腹腔液与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)对体外培养的颗粒细胞的功能和自噬的影响，从而探讨腹膜型EMS的不孕原因。
方法体外培养人卵巢颗粒细胞系KGN，分别加入EMS患者腹腔液(EMS组)和重组TNF-α蛋白(浓度分别为1 μg/L、10 μg/L、100 μg/L)(TNF-α组)处理细胞，以非EMS患者腹腔液作对照组。采用CCK-8法检测细胞增殖水平，流式细胞术和线粒体膜电位检测细胞凋亡，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液雌二醇和孕酮水平，蛋白质印迹法检测自噬标志物LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和p62，透射电子显微镜观察自噬小体数量。
结果加入EMS患者腹腔液可抑制KGN颗粒细胞增殖(P<0.001)，促进颗粒细胞凋亡(P=0.009)，减少雌、孕激素的分泌(P<0.001，P=0.005)；EMS患者腹腔液和高浓度重组TNF-α蛋白可促进颗粒细胞自噬标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上升(P<0.001)，p62蛋白减少(P<0.05)，自噬体数量增加(P<0.001)，自噬过度激活。
结论EMS患者腹腔液和TNF-α通过抑制卵巢颗粒细胞增殖、促进凋亡，影响雌、孕激素的分泌和过度自噬等多个环节影响颗粒细胞的功能，进而可能通过颗粒细胞的旁分泌和自分泌功能影响卵子质量、受精及随后的胚胎发育和胚胎着床，从而导致EMS患者不孕。