【摘 要】
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目的 构建大容量(＞108)的人源天然噬菌体抗体库.方法 提取人外周血淋巴细胞mRNA,反转录出cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增重链(VH)和轻链(VL)基因片段.将VL基因PCR产物插入含Lo
【机 构】
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武汉生物制品研究所,武汉,430060北京生物制品研究所,北京,100024;
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目的 构建大容量(＞108)的人源天然噬菌体抗体库.方法 提取人外周血淋巴细胞mRNA,反转录出cDNA第一链,以此为模板,PCR扩增重链(VH)和轻链(VL)基因片段.将VL基因PCR产物插入含Loxp和Loxp511序列的pDF载体中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建轻链库,再将VH基因PCR产物插入轻链库载体中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,构建初级库.进一步用初级库超感染BS1365菌,使其VH与VL发生重组,获得重组库,再利用重组库感染大肠杆菌XLI-Blue,构建工作库.结果 所有VH和VL亚类基因的扩增产物片段大小均与理论值相符,轻重链基因的克隆效率均为100%.初级库容量为108,滴度为6×1013;重组后的工作库有效容量为8×1010滴度至少为1×1013.结论 已构建容量为1010的人源天然噬菌体抗体库.
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