马氏珍珠贝肉蛋白水解特征及其ACE抑制肽的筛选

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为探索马氏珍珠贝肉的水解规律及快速鉴定血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制活性肽,本研究以不同时间(2、4、6、8、10h)的酶解物为对象,采用三羟甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、分子质量分布、反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)表征其水解规律.另外,对10 h酶解物进行初步分离纯化,鉴定高活性组分中的肽序列,并采用分子对接的方法对鉴定的肽进行筛选,验证筛选肽的活性,阐释其抑制机理.结果表明,马氏珍珠贝肉在酶解过程中,大分子质量蛋白逐渐水解为小分子肽,在RP-HPLC上出现某一特征峰的富集.初步分离后,发现F2、F3组分具有较高的ACE抑制活性,从这2个组分中共获得了可信度较高的54个肽序列.分子对接筛选出6个潜在的ACE抑制肽,在1mg/mL时,5个肽具有不同程度的ACE抑制活性,其中,WFHAVFW和WHAFLW显示了最高的ACE抑制活性,分别为(95.57±0.37)%和(98.59±0.08)%,进一步测定六肽WHAFLW的半抑制浓度(IC50)值,为52.39 μmol/L.分子对接显示肽的抑制机理可能是通过氢键、范德华作用以及Pi-Pi作用形成稳定的肽-酶复合物.本研究既揭示了珍珠贝肉蛋白不同酶解时间的规律变化,又将活性实验跟踪与计算机辅助筛选相结合,提供了一种快速筛选酶解物中高活性ACE抑制肽的方法.
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