拟蜘蛛拖丝蛋白基因重组蛋白的纯化及其抗血清制备

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【摘要】

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为了制备可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,利用前期工作中获得的蜘蛛拖丝蛋白基因重组原核表达载体2S-pET-52b（＋）,采用原核表达方法获得大量重组蜘蛛拖丝蛋白2S-His,对此

【作者】

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王春生罗芳张志人赵健灵朴善花安铁洙

【机构】

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东北林业大学生命科学学院

【出处】

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四川动物

【发表日期】

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2011年4期

【关键词】

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蜘蛛拖丝蛋白原核表达蛋白纯化抗血清制备 spider dragline silk protein prokaryotic expression pro

【基金项目】

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国家自然科学基金资助项目（30571325 30771538）, 黑龙江省博士后基金项目

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为了制备可用于拟蜘蛛拖丝蛋白体外检测的抗血清,利用前期工作中获得的蜘蛛拖丝蛋白基因重组原核表达载体2S-pET-52b（＋）,采用原核表达方法获得大量重组蜘蛛拖丝蛋白2S-His,对此重组蛋白进行His标签特异性的亲和纯化,再依次经SDS-PAGE、切胶和与佐剂混合后作为抗原;皮下多点注射法将抗原注入新西兰大白兔皮下进行免疫;采集已免疫的兔血清,采用ELISA检测方法对其效价进行检测。结果显示,重组质粒2S-pET-52b（＋）转化BL21-pLysS后获得最佳的表达菌株;在筛选得到的最佳IPTG、温度和

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