【摘 要】
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目的 探讨MicroRNA-29a (miR-29a)调控结直肠癌细胞HCT-8对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性,以及miR-29a对PTEN蛋白的靶向作用.方法 体外培养结直肠癌细胞株HCT-8和5-FU耐药
【机 构】
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青岛市市立医院(本部)普外科,山东青岛266011;青岛市市立医院(本部)肿瘤二科,山东青岛266011;青岛市市立医院(东院区)药学部,山东青岛266011;青岛市第九人民医院普外科,山东青岛266
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目的 探讨MicroRNA-29a (miR-29a)调控结直肠癌细胞HCT-8对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性,以及miR-29a对PTEN蛋白的靶向作用.方法 体外培养结直肠癌细胞株HCT-8和5-FU耐药细胞株HCT-8/FU,分别加入适量5-FU,终浓度为0、12.5、25、50、100、200μ g/ml的5-FU分别处理HCT-6和HCT-8/FU,培养48h后,用CCK-8法测定,计算IC50;用RT-PCR法检测两株细胞中miR-29a和PTEN的表达情况.耐药细胞株中转染miR-29a inhibitor,CCK-8检测药物敏感性.通过Targetscan网站预测miR-29a的靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验验证.shRNA抑制细胞中PTEN的表达,CCK-8法检测不同浓度5-FU作用HCT-8/FU细胞的IC50;Western blot检测敲低miR-29a时,PTEN、AKT及p-AKT蛋白表达变化.结果 HCT-8/FU的IC50显著高于HCT-8细胞,miR-29a在HCT-8/FU细胞中表达上调,但PTEN在HCT-8/FU细胞表达下调.miR-29a inhibitor转染HCT-8/FU细胞后,HCT-8/FU细胞的IC50降低.PTEN是miR-29a的靶基因,PTEN表达下调可升高HCT-8/FU细胞IC50,miR-29a抑制物可促进PTEN表达,并抑制p-AKT蛋白水平.结论 抑制miR-29a在耐药结直肠癌细胞中的表达可增加细胞对5-FU的药物敏感性,与PTEN/AKT信号通路有关.
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