制备靶向潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A，LMP2A)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)－T细胞，观察LMP2A CAR－T细胞体内外对鼻咽癌细胞的杀伤作用。
方法2016年9月至2017年12月，本研究以基因工程技术构建抗LMP2A慢病毒表达载体，测序鉴定并通过Western blot法验证抗LMP2A CAR在293T细胞中的表达；通过质粒包装体系制备LMP2A CAR慢病毒，并感染人T细胞，制备LMP2A CAR－T细胞；CCK－8法检测LMP2A CAR－T细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测LMP2A抗原激活后的LMP2A CAR－T细胞白细胞介素(IL)－2与干扰素(IFN)－γ的分泌水平。体内实验观察LMP2A CAR－T细胞对鼻咽癌移植瘤的抑瘤作用。SPSS 21.0统计学软件用于统计分析。
结果PCR结果显示抗LMP2A CAR片段大小约为1 500 bp，与理论值相一致，测序显示序列正确；Western blot结果显示抗LMP2A慢病毒表达载体能在293T细胞中表达；CCK－8法结果发现在效靶比为20∶1、10∶1与5∶1时，LMP2A CAR－T细胞对LV－LMP2A－CNE1细胞的杀伤率分别为(72.11±9.75)%、(54.65±5.42)%与(36.68±3.80)%，与CD19 CAR－T细胞、T细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)，而对CNE1细胞的杀伤作用与CD19 CAR－T细胞和T细胞相比差异无统计学意义；ELISA法结果发现LMP2A CAR－T细胞与LV－LMP2A－CNE1细胞共培养上清中IL－2与IFN－γ的含量，显著高于与CNE1细胞共培养上清，差异具有统计学意义(P<0.05)；体内实验中LMP2A CAR－T细胞组瘤体体积为(80.3±10.0)mm3，显著小于各对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论成功制备的LMP2A CAR－T细胞对LMP2A阳性的鼻咽癌细胞具有显著靶向杀伤效应。