p53是一种肿瘤抑制基因,在细胞周期阻滞、细胞凋亡、衰老和自噬过程中发挥着调控作用,在机体的各个组织中广泛表达。本研究旨在构建牛p53基因真核表达载体并研究其在牛卵母细胞中的表达和定位。首先从牛(Bos taurus)卵丘细胞中克隆了p53基因并将其连接到pMD19-T载体上,双酶切鉴定后定向连接到pVenus载体上构建了pVenus-p53真核表达载体,经脂质体2000介导转染Hela细胞,确定重组质粒在Hela细胞中的表达定位,主要定位于细胞核。然后用体外转录试剂盒将p53-Venus转录成cRNA,通过显微注射观察其在卵母细胞中的表达定位情况,主要定位于细胞核,但胞质中也有少量表达。最后,取体外培养不同时期的牛卵母细胞,通过实时定量PCR检测p53在体外培养不同时期的表达量的变化,采用2-ΔΔCt法分析p53/β-actin表达水平的变化值,p53的表达从GⅤ期到MⅠ期迅速升高,在MⅠ期其表达量达到最高,随后又逐渐降低。本研究构建了牛p53真核表达载体pVenus-P53,并且体外转录的p53-VenuscRNA能在牛卵母细胞中正确表达定位,检测了p53在牛卵母细胞成熟培养各个时期表达量的变化,为进一步研究p53在牛卵母细胞体外成熟中的作用提供了参考资料。