【摘 要】
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目的:利用酵母双杂交技术筛选FHL2的相互作用蛋白,为进一步研究FHL2的功能奠定基础.方法:从卵巢文库中钓取FHL2 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-FHL2,利用酵母双杂交筛选技术,
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目的:利用酵母双杂交技术筛选FHL2的相互作用蛋白,为进一步研究FHL2的功能奠定基础.方法:从卵巢文库中钓取FHL2 cDNA,构建诱饵蛋白载体pAS2-1-FHL2,利用酵母双杂交筛选技术,在卵巢文库中筛选与FHL2相互作用的蛋白.将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2-1-FHL2的酵母菌进行交配实验,利用LacZ报告基因检测FHL2与候选蛋白之间是否存在相互作用.将FHL2和候选蛋白分别构建到pGEX-KG和pET-28a上,并纯化GST-FHL2和His-候选蛋白融合蛋白,利用GST沉淀实验进一步验证FHL2和候选蛋白的体外相互作用.结果:所获取的候选蛋白为IGFBP-7,是胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)家族中的一员.交配实验表明,IGFBP-7与FHL2能特异性地相互作用,而不与空载体或BRCT1对照相互作用.GST沉淀实验进一步验证,IGFBP-7能与FHL2结合,而不与GST结合.结论:FHL2和IGFBP-7在体内及体外均可发生特异性的相互作用.
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