【摘 要】
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目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)napA基因真核表达系统,了解其在小鼠肌细胞中的表达情况.方法根据GenBank中Hp napA基因序列(AF227075)和真核表达质粒多克隆位
【机 构】
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中南大学湘雅医学院,沅江市第四人民医院
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目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)napA基因真核表达系统,了解其在小鼠肌细胞中的表达情况.方法根据GenBank中Hp napA基因序列(AF227075)和真核表达质粒多克隆位点序列设计引物,以Hp-RNA逆转录产物为模板,扩增Hp napA编码基因,用基因重组技术将目的基因定向克隆到pcDNA3多克隆位点上,转化大肠杆菌,经质粒扩增和DNA测序后,进行小鼠肌肉免疫、目的基因表达水平和抗体水平检测.结果 经双酶切、PCR和测序验证,真核表达质粒Hp napA/pcDNA3构建成功.动物实验结果表明:真核重组质粒在小鼠肌细胞内获良好表达,表达产物能刺激机体产生一定效价的抗体.结论 成功构建了Hp napA/pcDN3真核重组表达质粒;用以免疫小鼠,在小鼠肌细胞内获较好表达并具有免疫原性,有用于疫苗研究的潜在价值.
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