【摘 要】
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目的 构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性.方法 以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆人pTE
【机 构】
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上海美恩生物技术有限公司,同济大学生命科学与技术学院
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目的 构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性.方法 以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆人pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆人表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析.MTT法检测rhlGF-1促MCF-7细胞的增殖作用.结果 转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7 700的目的 蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%.Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用.结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1.
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