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采用定点突变技术,将组成人胰岛素原基因的C、A两条肽链进行了PCR突变连接,构建了人胰岛素C、A突变基因。采用T-A法将PCR产物B、CA克隆到T载体,分别构建了中间体pHB和pHCA,其测序结果与GenBank公布的一致。应用BamH I和Sse8387 I对pHB和pHCA进行双酶切,然后将回收纯化的片段进行定向连接,构建了重组质粒pHBCA,酶切分析证实重组质粒pHBCA构建成功。