损伤肝脏条件培养液体外诱导小鼠骨髓单个核细胞分化为肝细胞的研究

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目的 探索小鼠骨髓单个核细胞(BM MNCs)体外诱导分化为肝细胞的可行性及方法.方法 将四氯化碳注射的小鼠肝脏进行培养,收集上清液,用于诱导BM MNCs分化.观察细胞分化中的形态变化;在1、7、14、21 d时,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光反应检测甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)、CK19、肝细胞核因子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基转移酶(TAT)和白蛋白(ALB)基因的表达,过碘酸Schiff氏剂反应(PAS)检测细胞糖原合成.结果 诱导组细胞呈肝细胞样变化;RT-PCR检测,第7天可见AFP、CK19基因表达,第14天AFP表达增强,第21天减弱;第14天可见ALB、CK18、HNF3β基因表达,且持续到第21天;第21天TAT表达.免疫荧光反应结果显示,第21天ALB、CK18、CK19、AFP表达呈阳性;同时PAS糖原合成反应也出现阳性.结论 BMMNCs在损伤肝脏条件培养液诱导下可跨越分化为肝细胞,该方法的建立对分化机制研究有重要意义。

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